甲狀旁腺激素(1-34)對(duì)豚鼠自發(fā)性O(shè)A模型作用的體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究甲狀旁腺激素（Parathyroid Hormone(1-34)，PTH(1-34)）對(duì)雌性 DH豚鼠原發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎（OA）關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨的作用，并探討 PTH(1-34)對(duì)白介素-1β（Interleukin-1β, IL-1β）誘導(dǎo)的體外分離培養(yǎng)的DH豚鼠軟骨細(xì)胞炎性反應(yīng)的影響。
　　方法：1、36只1月齡雌性DH豚鼠隨機(jī)分成兩組：對(duì)照組24只，分別于1，3，6和9月齡處死；給藥（PTH）組12只，從3月齡開(kāi)始給

2、予 PTH(1-34)（15μg/kg/d，每周5天），分別于6月齡和9月齡處死。采用 Masson染色和Mankin評(píng)分來(lái)評(píng)估軟骨的退變情況，采用雙能X線骨密度儀測(cè)量股骨遠(yuǎn)端1/4和股骨內(nèi)外側(cè)髁軟骨下骨的骨密度，免疫組織化學(xué)染色分析Ⅱ型膠原（TypeⅡ Collagen,ColⅡ）和基質(zhì)金屬蛋白酶-13（Matrix Metalloproteinase-13，MMP-13）的表達(dá)情況。2、取健康1月齡豚鼠的膝關(guān)節(jié)表面軟骨組織，采用胰酶

3、消化法進(jìn)行軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)。采用甲苯胺藍(lán)染色法鑒定軟骨細(xì)胞。MTT比色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度PTH(1-34)對(duì)軟骨細(xì)胞活力的影響，以確定實(shí)驗(yàn)藥物濃度。10ng/ml人重組IL-1β干擾體外培養(yǎng)的正常豚鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，誘導(dǎo)其發(fā)生 OA軟骨細(xì)胞樣改變。第3代軟骨細(xì)胞融合后分為3組，即空白對(duì)照組，IL-1β組和PTH10-7M組，然后通過(guò)Western blot法觀察ColⅡ和MMP-13的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、組織學(xué)和Mankin評(píng)分分

4、析顯示DH豚鼠于3月齡時(shí)自發(fā)形成OA并隨著年齡的增加而嚴(yán)重，軟骨下骨的骨密度逐漸升高，給予PTH(1-34)治療后上述變化明顯減輕，軟骨下骨的性能也得以改善。免疫組化顯示經(jīng) PTH(1-34)治療后軟骨中的ColⅡ表達(dá)增加而MMP-13表達(dá)減少。2、體外分離培養(yǎng)的DH豚鼠軟骨細(xì)胞增殖快，原代種植后2h左右即開(kāi)始貼壁，10h后軟骨細(xì)胞逐漸增大，呈圓形或多角形，2d左右即可密集成片，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。較體外培養(yǎng)兔、大鼠、小鼠以及人膝軟骨細(xì)胞的周

5、期明顯縮短，節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。3、甲苯胺藍(lán)染色：培養(yǎng)細(xì)胞呈異染性，證明培養(yǎng)的細(xì)胞為軟骨細(xì)胞。4、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果：PTH(1-34)10-7M濃度組豚鼠軟骨細(xì)胞的活性明顯升高。5、Western blot結(jié)果：IL-1β刺激后ColⅡ水平較空白對(duì)照組明顯降低，MMP-13水平明顯升高，加入 PTH(1-34)后，與 IL-1β組相比，ColⅡ水平升高，MMP-13水平降低。
　　結(jié)論：1、PTH(1-34)對(duì)DH豚鼠關(guān)節(jié)軟骨具有保護(hù)作用