關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射HA對兔膝內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)后OA關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的作用.pdf

1、目的：觀察關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射HA對兔內(nèi)側(cè)半月板全部切除術(shù)后OA關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法：選取健康成年新西蘭大耳白兔30只，隨機分為三組：假手術(shù)組（A組）6只；HA實驗組（B組）12只；模型組（C組）12只。除A組6只行雙膝關(guān)節(jié)囊切開外，其余24只（B組和C組）行右膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)半月板全部切除術(shù)制模，術(shù)后第4周開始，B組右膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射透明質(zhì)酸0.5 m L，A組和C組于相同時間相同方法注射

2、等量的生理鹽水，每周1次，連續(xù)5次。于末次給藥后兩周（術(shù)后11周），采用空氣栓塞法處死全部兔子，取股骨內(nèi)髁軟骨面標(biāo)本行大體和光鏡組織學(xué)觀察，原位細(xì)胞凋亡（TUNEL）技術(shù)檢測軟骨細(xì)胞凋亡，免疫組織化學(xué)和Western-blot手段檢測軟骨細(xì)胞iNO\蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：（1）軟骨標(biāo)本大體觀察：A→C組軟骨標(biāo)本大體評分逐漸升高，B組軟骨標(biāo)本評分為（1.25±0.45），明顯低于C組評分（3.08±0.29），差異有統(tǒng)計學(xué)意

3、義（P<0.01）。（2）光鏡組織學(xué)觀察：C組可見關(guān)節(jié)軟骨表面纖維化，甚至形成糜爛、潰瘍，表層軟骨細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，中層細(xì)胞呈特征性簇狀排列，軟骨空陷窩數(shù)增多，軟骨空陷窩率為（22.75±2.70）％，B組軟骨表層略不平整，細(xì)胞排列欠規(guī)整，部分軟骨細(xì)胞簇聚成團，軟骨空陷窩率為（15.91±3.03）％，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。（3）TUNEL_法測試細(xì)胞凋亡：A→C組凋亡指數(shù)逐漸升高，B組凋亡指數(shù)為（13

4、.42±2.57）％，低于C組（21.83±2.12）％（P<0.01）。（4）細(xì)胞iNOS蛋白表達(dá)：A→C組iNOS免疫組化染色陽性率和Western-blot檢測的蛋白相對表達(dá)量逐漸升高，B組免疫組化陽性細(xì)胞率為（26.83±6.69）％，低于C組（41.83±4.17）％，Western-blot檢測B組iNOS蛋白相對表達(dá)量為（2.69±0.23），低于C組（3.60±0.18）％，兩者比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。<