抗人異麥芽糖酶卵黃抗體和蔗糖酶卵黃抗體的制備及其活性探討.pdf

1、目的：制備抗人異麥芽糖酶卵黃抗體(I-IgY)和抗人蔗糖酶卵黃抗體(S-IgY)，探討其對(duì)Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠血糖的影響。
　　方法：(1)抗人I-IgY和S-IgY的制備及鑒定：人異麥芽糖酶（ISO）和人蔗糖酶（SUC）作為抗原免疫產(chǎn)蛋雞，硫酸鈉水稀釋提取法分離純化雞IgY，BCA法測(cè)定蛋白含量， SDS-PAGE分析IgY純度，間接ELISA法檢測(cè)IgY的效價(jià)，Western blot鑒定IgY的特異性；PNPG法測(cè)Ig

2、Y對(duì)α-葡萄糖苷酶的體外抑制效果；ELISA法評(píng)價(jià)在不同溫度、不同pH、胃蛋白酶、胰蛋白酶的條件下IgY的穩(wěn)定性；灌胃BALB/c小鼠檢測(cè)IgY的毒性。(2)建立T2DM大鼠模型：高糖高脂飼料喂養(yǎng)的SD大鼠經(jīng)腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ），獲得T2DM大鼠模型。(3)抗人I-IgY和S-IgY對(duì)T2DM大鼠空腹血糖影響：正常組、T2DM模型對(duì)照組、抗人I-IgY干預(yù)組、抗人S-IgY干預(yù)組和阿卡波糖干預(yù)組連續(xù)灌胃4周，分別在第2、3、4周

3、測(cè)定其空腹血糖（FBG）水平。(4)抗人I-IgY和S-IgY對(duì)T2DM大鼠糖耐量的影響：每組大鼠禁食不禁水12小時(shí)后，正常組模型對(duì)照組灌胃葡萄糖溶液，抗人 I-IgY組灌胃葡萄糖溶液和抗人 I-IgY，抗人S-IgY組灌胃葡萄糖溶液和抗人S-IgY，阿卡波糖組灌胃葡萄糖溶液和阿卡波糖。分別于0、1、2小時(shí)后尾靜脈取血檢測(cè)血糖水平。
　　結(jié)果：(1)硫酸鈉水稀釋提取法獲得的IgY含量高且蛋白雜帶較少，抗人I-IgY和S-IgY效價(jià)

4、達(dá)1:12800，Western blot檢測(cè)結(jié)果表明兩種IgY均能與相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合。(2)抗人I-IgY和S-IgY對(duì)α-葡萄糖苷酶的半抑制濃度值（IC50）分別為0.616mg/mL和0.537mg/mL。(3)抗人S-IgY相對(duì)于抗人I-IgY，其擁有較好的熱穩(wěn)定性、較好的酸堿穩(wěn)定性和相對(duì)較好的胃蛋白酶抵抗力，但對(duì)胰蛋白酶抵抗力較差，兩種 IgY對(duì)BALB/c小鼠均沒有毒性。(4)T2DM大鼠建模成功；(5)與對(duì)照組相比，抗