家蠅短型肽聚糖識別蛋白基因的克隆與功能鑒定.pdf

1、家蠅在地球上廣泛分布，常常生長在病菌滋生的環(huán)境中，對環(huán)境的適應(yīng)能力很強。肽聚糖識別蛋白（PGRPs）是先天免疫分子，存在于昆蟲，軟體動物，棘皮動物和脊椎動物之中，而不存在于線蟲和植物中。它可以與細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分肽聚糖結(jié)合，通過激活Toll或Imd信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，或誘導(dǎo)蛋白水解級聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生抗菌蛋白，引起吞噬作用，水解肽聚糖來抵擋感染。對家蠅肽聚糖識別蛋白功能的研究對了解家蠅的抗菌機制有著重要意義。本文以家蠅為研究對象，研究內(nèi)容主要包括以

2、下兩個部分：
　　第1部分：通過對轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫進行搜索，發(fā)現(xiàn)了5條新的肽聚糖識別蛋白基因序列，使用 PCR技術(shù)對其序列進行驗證，通過同源比對分別命名為MdPGRP-SA、MdPGRP-SB、MdPGRP-SC2、MdPGRP-SC3和MdPGRP-SD，并對其核苷酸和編碼的蛋白序列進行了生物信息學(xué)分析。
　　第2部分：以管家基因β-actin作為內(nèi)參分子，利用實時熒光定量 PCR（RT-qPCR）方法對經(jīng)過金黃色葡萄球菌和大

3、腸桿菌刺激后的家蠅以及不同組織，不同發(fā)育階段的家蠅中PGRP基因的mRNA表達(dá)水平進行了定量研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比MdPGRP-SA、MdPGRP-SB和MdPGRP-SD在金黃色葡萄球菌刺激后發(fā)生表達(dá)上調(diào)，隨后出現(xiàn)一個恢復(fù)，最后再次顯著上調(diào)；在大腸桿菌刺激后，MdPGRP-SA在后期發(fā)生上調(diào)，而MdPGRP-SB和MdPGRP-SD基因在刺激初期發(fā)生上調(diào)，隨后表達(dá)逐漸恢復(fù)正常。MdPGRP-SC2和MdPGRP-SC3在金黃色葡