IFN-γ對小鼠急性過敏性氣道炎癥的抑制作用.pdf

1、研究背景：
　　過敏性氣道炎癥是過敏性哮喘的病理生理基礎，由對外部刺激不適當?shù)拿庖邞鹨?。長期以來一直認為哮喘是由抗原誘導 Th2細胞活化引起的。近期的研究表明2型固有淋巴細胞(Group2 innate lymphoid cells, ILC2s)在哮喘的發(fā)生過程中發(fā)揮重要的作用。
　　ILC2s廣泛分布于脂肪相關淋巴集簇和包括皮膚、肝臟、肺、小腸、內(nèi)臟脂肪組織在內(nèi)的非淋巴組織。上皮來源的細胞因子胸腺基質淋巴細胞生成素(

2、Thymic stromal lymphopoietin, TSLP)、白細胞介素-33（Interleukin-33, IL-33）、IL-25均可以活化ILC2s。IL-33是IL-1家族中的一員，IL-33可以與ILC2s表面表達的ST2-IL-1受體輔助蛋白復合體結合，活化ILC2s，并分泌大量Th2型細胞因子IL-5、IL-13等。IL-5可以促進嗜酸性粒細胞的聚集、加劇炎癥反應；IL-13可以促進杯狀細胞分泌黏液和平滑肌細胞

3、收縮。
　　初始CD4+T細胞可以分化為Th1或Th2細胞，Th1型細胞因子和Th2型細胞因子可以交叉調節(jié)Th2和Th1細胞的發(fā)育和分化。干擾素-γ(Interferon-γ, IFN-γ)可以由Th1細胞、CD8+T細胞、NK細胞和NKT細胞和其他細胞分泌，可以觸發(fā)1型免疫反應、抑制2型免疫反應。然而IFN-γ對ILC2s功能的影響目前尚不清楚。鑒于ILC2s是Th2細胞的“鏡像細胞”，我們猜測IFN-γ對ILC2s可能也存在抑

4、制作用。
　　研究目的：
　　本研究采用經(jīng)鼻滴入IL-33的方法建立小鼠急性過敏性氣道炎癥模型，并用IFN-γ進行干預，觀察IFN-γ對小鼠急性過敏性氣道炎癥的影響，并探究IFN-γ抑制小鼠急性過敏性氣道炎癥中ILC2s的作用機制及其對IL-5、IL-13產(chǎn)生的影響，為臨床急性過敏性氣道炎癥的治療提供理論依據(jù)。
　　實驗方法：
　　24只雌性C57BL/6（6-8w）小鼠隨機分為4組，每組6只。IL-33模型組、

5、單獨IFN-γ組、PBS對照組、IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組。在實驗第0 d和第3 d進行滴鼻刺激，第6 d處死小鼠收集支氣管灌洗液（Bronchial alveolar lavage fluid, BALF)和肺組織。肺組織切片進行蘇木素-伊紅染色(Hematoxylin and eosin, HE)和過碘酸-雪弗染色(Periodic acid-Schiff reagent, PAS)觀察病理變化。流式細胞術對 ILC2s、嗜酸

6、性粒細胞進行分析。酶聯(lián)免疫吸附實驗（ Enzyme- linked immunosorbent assay, ELISA）檢測肺勻漿和BALF上清中IL-5和IL-13的含量。實時聚合酶鏈式反應（Real time polymerase chain reaction, Real-time PCR）檢測IL-5、IL-13和ST2 mRNA表達量的變化。
　　實驗結果：
　　1.小鼠肺組織切片染色結果
　　（1）HE結果

7、顯示：與PBS對照組相比，IL-33模型組細支氣管及伴行血管周圍有大量炎性細胞浸潤；與IL-33模型組相比，IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組肺組織中仍有炎性細胞浸潤，但明顯減輕。
　?。?）PAS結果顯示：與PBS對照組相比，IL-33模型組支氣管黏膜處可見大量杯狀細胞增生且分泌大量黏液；與IL-33模型組相比，IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組支氣管黏膜雖有杯狀細胞增生和黏液分泌，但明顯減少。
　　2.小鼠BALF和肺單細胞

8、懸液中ILC2s和嗜酸性粒細胞的流式結果
　　流式結果顯示：與PBS對照組相比，IL-33模型組BALF和肺組織中的嗜酸性粒細胞和ILC2s占總上樣細胞數(shù)的比例和絕對值均升高（P<0.05）；與IL-33模型組相比，IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組BALF和肺組織中的嗜酸性粒細胞ILC2s占總上樣細胞數(shù)的比例和絕對值均降低（P<0.05）。
　　3.小鼠BALF與肺勻漿上清中IL-5、IL-13 ELISA結果
　　E

9、LISA結果顯示：與PBS對照組相比，IL-33模型組小鼠BALF和肺勻漿上清中的IL-5、IL-13含量升高（P<0.05）；與IL-33模型組相比，IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組BALF和肺勻漿上清中IL-5、IL-13含量降低（P<0.05）。
　　4.小鼠肺IL-5、IL-13、ST2Real-time PCR結果
　　Real-time PCR結果顯示：與PBS對照組相比，IL-33模型組小鼠肺中IL-5、IL-