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文檔簡(jiǎn)介
1、哮喘是全球最常見的呼吸系統(tǒng)疾病之一,它是一種以氣道炎癥和氣道高反應(yīng)為主要特征的慢性呼吸系統(tǒng)疾病,可以累及所有年齡組人群,嚴(yán)重危害人類健康,給病人以及社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。哮喘的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,包括不同淋巴細(xì)胞亞群的失平衡,嗜酸性粒細(xì)胞的氣道浸潤(rùn),肺泡巨噬細(xì)胞功能異常及多種細(xì)胞因子和免疫球蛋白過(guò)度表達(dá)等。盡管近年來(lái)對(duì)哮喘的機(jī)制研究已有了很大的進(jìn)展,但是目前仍然缺乏有效的治療手段來(lái)很好地控制較難治的哮喘及其相關(guān)的炎癥反應(yīng)。近年來(lái),許多傳
2、統(tǒng)中藥對(duì)于哮喘的治療作用逐漸受到人們的關(guān)注。魚藤素是豆科藤本植物家族的重要組成部分。在腫瘤小鼠模型中,它能夠通過(guò)抑制磷脂酰肌醇3激酶信號(hào)通路產(chǎn)生抗增殖作用。不僅如此,也有文獻(xiàn)報(bào)道魚藤素能夠有效地抑制核轉(zhuǎn)錄因子kappa B(NF-κB)信號(hào)通路,具有很強(qiáng)的抗炎作用。目前,魚藤素在哮喘相關(guān)的過(guò)敏性氣道炎癥反應(yīng)中的作用及其機(jī)制尚未明確。
本研究中,我們以卵白蛋白致敏聯(lián)合霧化激發(fā)的方法建立小鼠急性哮喘模型,用魚藤素或地塞米松進(jìn)行腹腔
3、注射治療哮喘小鼠。首先,我們通過(guò)小鼠肺泡灌洗及細(xì)胞分類計(jì)數(shù)方法明確氣道炎癥細(xì)胞的分類及浸潤(rùn)程度,通過(guò)肺組織病理切片進(jìn)行蘇木素-伊紅和過(guò)碘酸-希夫染色方法分析肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及黏液蛋白分泌,通過(guò)無(wú)創(chuàng)肺功能儀檢測(cè)哮喘小鼠的氣道高反應(yīng)性。然后,通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)小鼠血清免疫球蛋白和細(xì)胞因子水平,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)輔助型T細(xì)胞(Th)2型細(xì)胞因子及炎癥相關(guān)因子的基因表達(dá),通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生
4、成素的表達(dá),探討魚藤素對(duì)哮喘小鼠體內(nèi)炎癥反應(yīng)的作用。隨后,我們進(jìn)一步用魚藤素處理人支氣管上皮細(xì)胞(BEAS-2B),通過(guò)細(xì)胞活性檢測(cè)試驗(yàn)檢測(cè)藥物的細(xì)胞毒性、通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)炎癥相關(guān)因子的基因表達(dá)。最后,我們用魚藤素和NF-κB抑制劑—BAY11-7082單獨(dú)或共同處理BEAS-2B細(xì)胞,用免疫印跡法檢測(cè)NF-κB信號(hào)通路上下游蛋白的表達(dá),探討魚藤素對(duì)于哮喘相關(guān)炎癥反應(yīng)的作用及分子機(jī)制。
本研究發(fā)現(xiàn):在哮喘模型小鼠體內(nèi),
5、魚藤素能夠有效的減少卵白蛋白誘導(dǎo)的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),減輕肺組織的炎癥反應(yīng)和黏液生成,抑制氣道高反應(yīng)性,減少血清免疫球蛋白和Th2型細(xì)胞因子的表達(dá)水平,并呈現(xiàn)濃度依賴的變化。同時(shí),我們?cè)隗w內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),魚藤素能夠下調(diào)與NF-κB信號(hào)通路密切相關(guān)的炎癥基因的表達(dá),增強(qiáng)κB抑制因子α(IκBα)與NF-κB成員的結(jié)合能力,使NF-κB p65三聚體持續(xù)處于失活狀態(tài),進(jìn)而抑制NF-κB p65和IκBα的磷酸化,減少IκBα的降解和p65入核
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