ET-1受體拮抗劑和阿伐他汀聯(lián)合應(yīng)用在動(dòng)脈粥樣硬化病變進(jìn)程中的抑制作用.pdf

1、研究背景:隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人口的老齡化,動(dòng)脈粥樣硬化已經(jīng)成為嚴(yán)重危害人類健康的一大類疾病,它是造成心臟、腦及肢體缺血的主要原因.動(dòng)脈粥樣硬化性疾病已成為威脅人類的第一大殺手.據(jù)衛(wèi)生部公布的醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)資料表明:目前我國(guó)心血管疾病患者已超過(guò)1.5億,每年死于心血管疾病的患者高達(dá)400萬(wàn)人以上,約占我國(guó)因疾病導(dǎo)致死亡人數(shù)的50％,占世界心血管疾病死亡率的24％,并仍呈上升趨勢(shì)。而幸存下來(lái)的患者約有75％不同程度喪失了勞動(dòng)能力,多數(shù)患者留有精

2、神心理障礙,影響生活質(zhì)量.更令人擔(dān)憂的是,目前我國(guó)發(fā)生心血管事件的年齡越來(lái)越年輕化。現(xiàn)階段我國(guó)每年用于心血管疾痢患者直接住院費(fèi)用約為數(shù)百億元,給國(guó)家和家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因而早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)防心血管事件越來(lái)越重要,有利于降低心血管疾病的發(fā)生率、致殘率和致死率.動(dòng)脈粥樣硬化是累及全身血管的一組病變,如冠心病(coronary heart disease,CHD),是人體血管病變發(fā)展至不可逆階段的表現(xiàn)。研究表明,冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展是

3、一個(gè)漫長(zhǎng)的過(guò)程,在各種危險(xiǎn)因素的作用下,從最初的動(dòng)脈內(nèi)皮功能障礙、動(dòng)脈僵硬度的增加,到動(dòng)脈壁出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的脂質(zhì)條紋,發(fā)展為動(dòng)脈粥樣斑塊和血管重構(gòu),最后造成血管狹窄甚至是斑塊破裂或血栓形成導(dǎo)致血管腔完全閉塞引起心血管事件的發(fā)生,其中涉及內(nèi)皮功能受損、動(dòng)脈彈性的改變、內(nèi)中膜厚度的增加及炎癥的參與等,動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)發(fā)病機(jī)制的研究已經(jīng)經(jīng)歷了一個(gè)多世紀(jì),主要圍繞4種學(xué)說(shuō):脂肪浸潤(rùn)學(xué)說(shuō)、血小板聚集和血栓形成學(xué)說(shuō)

4、、平滑肌細(xì)胞克隆學(xué)說(shuō)和損傷反應(yīng)學(xué)說(shuō),但至今詳細(xì)發(fā)病機(jī)理仍未完全闡明。
　　 近來(lái)一些研究顯示:內(nèi)皮素與多種人類疾病有關(guān),包括粥樣硬化、高血壓、血管痙攣、以及充血性心衰的心肌肥厚和重塑。內(nèi)皮素家族有三種異構(gòu)體:內(nèi)皮素1、內(nèi)皮素2、內(nèi)皮素3,其中內(nèi)皮素1的生物學(xué)活性最為多樣,研究也最充分?，F(xiàn)已明確內(nèi)皮素1是含21個(gè)氨基酸的活性肽,與G蛋白偶聯(lián)受體A或者受體B結(jié)合后,可激活不同的信息通路,最終可發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。內(nèi)皮素-1(ET-1)

5、是迄今為止被認(rèn)為是最強(qiáng)的血管收縮肽。在高血壓和冠狀動(dòng)脈疾病患者,其血漿ET-1濃度是升高的.在粥樣斑塊局部也發(fā)現(xiàn)增高的ET-1濃度,認(rèn)為是由于內(nèi)皮細(xì)胞損傷、剪切力、缺血等因素所至的血管ET-1產(chǎn)生增加。有趣的是,ET-1及內(nèi)皮素系統(tǒng)被認(rèn)為是疾病與健康的雙刃劍,一方面,ET-1通過(guò)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)表面的ET受體亞單位A(ETA)介導(dǎo)了細(xì)胞增殖和血管收縮；另一方面,通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞表面的ETB受體介導(dǎo)了N0和前列環(huán)素的產(chǎn)生和血管舒張.

6、但是ET-1在粥樣硬化發(fā)病中的具體作用和確切機(jī)制目前仍不清楚。
　　 他汀類藥物是3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A(3-hydfoxy-3-methylglutaric acid,HMG-CoA)還原酶抑制劑,使肝細(xì)胞內(nèi)合成膽固醇作用受抑制,從而使血膽固醇的水平降低,降低動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病率和致死率,目前已成為治療動(dòng)脈粥樣硬化的基本藥物。其與內(nèi)皮素受體拮抗劑聯(lián)合使用,對(duì)粥樣硬化的報(bào)道尚未見(jiàn)到,本實(shí)驗(yàn)用免疫組織化學(xué)方法、RT-PCR、

7、ELISA等方法在動(dòng)物和細(xì)胞內(nèi)分別從蛋白和mRNA水平檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)ET-1、MMP、NO、CRP、NF-κB等的表達(dá),同時(shí)探討內(nèi)皮素受體拮抗劑和降脂治療聯(lián)合應(yīng)用對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響。
　　 目的:在成功建立實(shí)驗(yàn)兔動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)模型的基礎(chǔ)上,觀察實(shí)驗(yàn)兔動(dòng)脈粥樣硬化后血脂、血管內(nèi)皮活性物質(zhì)及血清炎性因子及核轉(zhuǎn)錄因子等水平的變化,體外實(shí)驗(yàn)采用LPS誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型,觀察細(xì)胞活

8、力、ROS等生化指標(biāo),并進(jìn)一步分析轉(zhuǎn)錄因子基因表達(dá)水平的變化,以探討ET-1受體拮抗劑和阿伐他汀聯(lián)合應(yīng)用在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程中的作用,并進(jìn)一步研究其機(jī)制。
　　 方法:40只新西蘭大耳白兔隨機(jī)分正常組(A=7)、高脂飼料聯(lián)合髂腹動(dòng)脈剝脫損傷組(B=12)、內(nèi)皮素拮抗劑預(yù)防組、達(dá)盧生坦聯(lián)合阿伐他汀預(yù)防組及達(dá)盧生坦聯(lián)合阿伐他汀治療組(C=21),損傷組以高脂飲食聯(lián)合髂腹動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)建立動(dòng)脈粥樣硬化模型,8周后損傷組隨機(jī)抽取5只,

9、觀察主動(dòng)脈病理形態(tài),以明確動(dòng)脈粥樣斑塊形成,損傷組、預(yù)防組及治療組喂養(yǎng)至16周末,并分別于基礎(chǔ)點(diǎn)、8周末及16周末檢測(cè)血脂總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血管內(nèi)皮活性物質(zhì)內(nèi)皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)及血清炎性因子(hs-CRP、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1)的含量；光鏡切片測(cè)量髂動(dòng)脈內(nèi)膜/中膜厚度,面積比；免疫組化及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)分析ET-1

10、、MMP-9、NF-κB在髂腹動(dòng)脈粥樣斑塊處的表達(dá)；體外實(shí)驗(yàn)采用LPS預(yù)處理VEC作為實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞,模擬體內(nèi)分為對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組,預(yù)處理后24h、72h檢測(cè)細(xì)胞增殖、凋亡及ROS生成情況,RT-PCR方法檢測(cè)ET-1、NF-κB、MMP-9的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:8周末、16周末損傷組血脂含量、ET-1、血清炎性因子含量明顯高于對(duì)照組,一氧化氮濃度降低,預(yù)防組,聯(lián)合預(yù)防組及治療組可有效降低血脂、ET-1、血清炎性因子含量,提高一氧

11、化氮濃度,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；光鏡切片分析損傷組髂動(dòng)脈內(nèi)膜/中膜厚度、面積(2.34±1.90,0.70±0.01)與正常組相比(1.35±0.87,0.40±0.01)顯著增加(P<0.01)；預(yù)防組、聯(lián)合預(yù)防組及治療組內(nèi)膜/中膜厚度,面積比值(1.35±2.61,1.40±0.18,0.44±0.01)明顯減少(P<0.01)；損傷組ET-1、NF-κB、MMP-9在動(dòng)脈內(nèi)膜內(nèi)蛋白水平及基因水平表達(dá)較正常組明顯增加,預(yù)

12、防組及治療組能明顯降低其表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；細(xì)胞水平觀察,與對(duì)照組比較,外源性ET-1受體拮抗劑和阿伐他汀能夠能明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞ET-1基因的表達(dá),實(shí)驗(yàn)組VECs NF-κB活性及ET-1、MMP-9明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01).
　　 結(jié)論:1.聯(lián)合使用ET-1受體拮抗劑和阿伐他汀可降低炎癥反應(yīng)；同時(shí)可通過(guò)降低ET,升高NO,降低兔髂腹動(dòng)脈球囊損傷后血管內(nèi)膜ICAM-1、VCAM-1、MMP-