赤潮毒素的毛細(xì)管電泳-酶聯(lián)免疫分析方法的研究.pdf

1、本論文研究了利用辣根過氧化物酶(HRP)催化鄰氨基酚(OAP)與H2O2的反應(yīng)，將毛細(xì)管電泳與酶聯(lián)免疫分析相結(jié)合，對兩種赤潮毒素(神經(jīng)性貝毒，NSP和西加魚毒素，CFP)進(jìn)行了分別研究。在此基礎(chǔ)上，通過引入金納米粒子(AuNPs)作為標(biāo)記物，實(shí)現(xiàn)了對四種貝類毒素(麻痹性貝毒(PSP)、腹瀉性貝毒(DSP)、記憶缺失性貝毒(ASP)以及神經(jīng)性貝毒(NSP))的同時(shí)分離和檢測。全文共分為七章：
　　 第一章，概述了毛細(xì)管電泳的基本理

2、論，介紹了酶聯(lián)免疫分析的研究進(jìn)展以及赤潮毒素的研究現(xiàn)狀。
　　 第二章，介紹了電化學(xué)檢測電極的改進(jìn)方法以及聚乙烯醇和檸檬酸鈉混合制作涂層毛細(xì)管的技術(shù)，并研究了Pt電極的污染情況。
　　 第三章，研究了毛細(xì)管電泳HRP-H2O2-OAP酶聯(lián)免疫分析電化學(xué)檢測平臺(tái)的建立，考察了包括運(yùn)行緩沖溶液濃度和pH值、分離電壓、檢測電位、進(jìn)樣條件在內(nèi)的各個(gè)實(shí)驗(yàn)條件對HRP檢測的影響，確定了最佳檢測條件。在最佳檢測條件下，HRP的線性范圍

3、為2.3×10-12-3.5×10-10mol/L，檢測限為1.09×10-12mol/L，質(zhì)量檢測限可以達(dá)到zmol水平。
　　 第四章，研究了使用HRP-H2O2-OAP體系的毛細(xì)管電泳-酶聯(lián)免疫分析新體系測定NSP的新方法。通過酶標(biāo)抗原(Ag*)與抗體(Ab)的特異性反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了對Ag*以及Ab-Ag*復(fù)合物的檢測；在此基礎(chǔ)上采用競爭免疫反應(yīng)模式，實(shí)現(xiàn)了對實(shí)際扇貝樣品中NSP的定性和定量檢測。此方法對NSP測定的線性范圍為

4、1.0-50.0 ng/mL，檢測限為0.1 ng/mL，比常規(guī)酶聯(lián)免疫法(ELISA)低4倍。
　　 第五章，研究了基于膠體金放大技術(shù)毛細(xì)管電泳-酶聯(lián)免疫分析測定CFP及魚類樣品的新方法。利用AuNPs作為固相載體，將酶(HRP)和抗體(Ab)同時(shí)固定在其表面，得到了酶標(biāo)抗體(Ab*)，增加酶的固定量，提高檢測靈敏度。通過抗原(Ag)與Ab*的特異性反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了對Ab*以及Ag-Ab*復(fù)合物的檢測；在此基礎(chǔ)上采用非競爭免疫反應(yīng)

5、模式，實(shí)現(xiàn)了對實(shí)際魚類樣品中CFP的定性和定量檢測。此方法對CFP測定的線性范圍為1.0-50.0 pg/mL，檢測限為0.3 pg/mL。
　　 第六章，研究了基于納米金技術(shù)的毛細(xì)管電泳-酶聯(lián)免疫同時(shí)分離分析四種貝類毒素的新方法，通過引入AuNPs作為標(biāo)記物，改變了原組分的遷移速率，使得原本無法完全分離的四種貝類毒素能夠很好的分離開來；再通過貝類樣品中的DSP、PSP、NSP毒素與酶標(biāo)抗原Ag*競爭有限量的抗體，ASP毒素和相