SAHA通過抑制NF-κB信號通路影響樹突狀細胞成熟及功能.pdf

1、背景:組蛋白去乙?；敢种苿╤istonedeacetylaseinhibitor，HDACI）作為一類新型抗腫瘤藥物已被大家熟知，然而，隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)其還能被用于治療多種非腫瘤性疾病，如炎癥、自身免疫性疾病、器官移植排斥等。SAHA(suberoylanilidehydroxamicacid)是目前研究得最多、最深入的一種HDACIs，它能夠有效抑制Ⅰ型和Ⅱ型HDACS、促使乙?；M蛋白增加、導致腫瘤細胞的轉錄過程出現(xiàn)異常

2、，進而誘導腫瘤細胞周期停滯、分化乃至凋亡。目前，人們對于SAHA的研究多局限于其抗腫瘤領域，而對其在免疫調節(jié)方面尤其是移植免疫領域的調節(jié)作用還了解甚少。探討SAHA在免疫調節(jié)方面的作用有助于我們更好的應用次藥并充分挖掘其抗腫瘤和免疫調節(jié)雙重作用，為臨床治療移植排斥、移植物抗宿主病(graft-versus-hostdisease，GVHD)等疾病奠定基礎。
　　目的:探討SAHA對人體外周血單個核細胞(PBMC)來源樹突狀細胞分化

3、、成熟及功能的影響，并研究其潛在作用機制，為將其應用于臨床治療器官移植排斥以及GVHD等疾病提供實驗依據(jù)。
　　方法:PBMC來自健康志愿者外周血，分配至3個培養(yǎng)組，各組PBMC經(jīng)貼壁處理后培養(yǎng)于含100ng/mlhGM-CSF、500U/mlhIL-4的淋巴細胞完全培養(yǎng)基中，隔天半定量換液并補充足量細胞因子，細胞培養(yǎng)至第6天，用脂多糖(LPS)刺激經(jīng)SAHA處理（LPS+SAHA組）和未經(jīng)處理（LPS組）的DC，另一未處理組設為

4、對照組（無LPS，無SAHA）。細胞培養(yǎng)期間，倒置顯微鏡下觀察各組細胞的形態(tài)學變化。細胞培養(yǎng)至8d收獲細胞。流式細胞儀檢測各組DC表面抗原的表達情況;采用混合淋巴細胞培養(yǎng)法(MLC)觀察各組DC對同種異體淋巴細胞的刺激作用;電泳遷移率實驗(EMSA)檢測SAHA對DCNF-κB信號通路活化的影響。
　　結果:單用LPS刺激(LPS組)成熟的DC體積明顯增大、細胞懸浮并大量聚集、形態(tài)不規(guī)則，有明顯“樹突狀”改變，而加用SAHA處理（

5、LPS+SAHA組）的DC雖大多懸浮，但體積未明顯增大，并無明顯“樹突狀”突起。經(jīng)LPS+SAHA處理的DC的表面抗原CD80、CD83、HLA-DR的表達量均低于LPS組和對照組（無LPS，無SAHA)，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。經(jīng)SAHA(100nM)+LPS處理的DC刺激同種異體淋巴細胞增殖的能力明顯低于LPS組和對照組(無LPS，無SAHA)，差別有顯著意義(P＜0.05)。EMSA檢測結果提示，經(jīng)過SAHA處理后，NF