SAHA通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路影響樹(shù)突狀細(xì)胞成熟及功能.pdf

1、背景:組蛋白去乙酰化酶抑制劑（histonedeacetylaseinhibitor，HDACI）作為一類(lèi)新型抗腫瘤藥物已被大家熟知，然而，隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)其還能被用于治療多種非腫瘤性疾病，如炎癥、自身免疫性疾病、器官移植排斥等。SAHA(suberoylanilidehydroxamicacid)是目前研究得最多、最深入的一種HDACIs，它能夠有效抑制Ⅰ型和Ⅱ型HDACS、促使乙?；M蛋白增加、導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄過(guò)程出現(xiàn)異常

2、，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞周期停滯、分化乃至凋亡。目前，人們對(duì)于SAHA的研究多局限于其抗腫瘤領(lǐng)域，而對(duì)其在免疫調(diào)節(jié)方面尤其是移植免疫領(lǐng)域的調(diào)節(jié)作用還了解甚少。探討SAHA在免疫調(diào)節(jié)方面的作用有助于我們更好的應(yīng)用次藥并充分挖掘其抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)雙重作用，為臨床治療移植排斥、移植物抗宿主病(graft-versus-hostdisease，GVHD)等疾病奠定基礎(chǔ)。
　　目的:探討SAHA對(duì)人體外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞分化

3、、成熟及功能的影響，并研究其潛在作用機(jī)制，為將其應(yīng)用于臨床治療器官移植排斥以及GVHD等疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:PBMC來(lái)自健康志愿者外周血，分配至3個(gè)培養(yǎng)組，各組PBMC經(jīng)貼壁處理后培養(yǎng)于含100ng/mlhGM-CSF、500U/mlhIL-4的淋巴細(xì)胞完全培養(yǎng)基中，隔天半定量換液并補(bǔ)充足量細(xì)胞因子，細(xì)胞培養(yǎng)至第6天，用脂多糖(LPS)刺激經(jīng)SAHA處理（LPS+SAHA組）和未經(jīng)處理（LPS組）的DC，另一未處理組設(shè)為

4、對(duì)照組（無(wú)LPS，無(wú)SAHA）。細(xì)胞培養(yǎng)期間，倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。細(xì)胞培養(yǎng)至8d收獲細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組DC表面抗原的表達(dá)情況;采用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)法(MLC)觀察各組DC對(duì)同種異體淋巴細(xì)胞的刺激作用;電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測(cè)SAHA對(duì)DCNF-κB信號(hào)通路活化的影響。
　　結(jié)果:單用LPS刺激(LPS組)成熟的DC體積明顯增大、細(xì)胞懸浮并大量聚集、形態(tài)不規(guī)則，有明顯“樹(shù)突狀”改變，而加用SAHA處理（

5、LPS+SAHA組）的DC雖大多懸浮，但體積未明顯增大，并無(wú)明顯“樹(shù)突狀”突起。經(jīng)LPS+SAHA處理的DC的表面抗原CD80、CD83、HLA-DR的表達(dá)量均低于LPS組和對(duì)照組（無(wú)LPS，無(wú)SAHA)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。經(jīng)SAHA(100nM)+LPS處理的DC刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖的能力明顯低于LPS組和對(duì)照組(無(wú)LPS，無(wú)SAHA)，差別有顯著意義(P＜0.05)。EMSA檢測(cè)結(jié)果提示，經(jīng)過(guò)SAHA處理后，NF