姜黃素通過抑制NF-κB通路逆轉吸煙誘導膀胱上皮細胞上皮間質(zhì)轉化.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩48頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、背景與研究目的:
  膀胱癌是世界上發(fā)病率較高的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一,其中最常見的病理類型是移行上皮細胞癌,具有復發(fā)性,浸潤性和難治愈性等特點。流行病學研究已經(jīng)證實香煙暴露是膀胱癌的重要誘發(fā)因素之一,但香煙暴露與膀腫癌進展的分子機制尚未得到充分研究。研究顯示上皮間質(zhì)轉化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)在腫瘤細胞的進展中起到至關重要的作用。大量研究證實姜黃素對多種腫瘤細胞的生長均有抑制作

2、用。實驗著重研究香煙暴露對膀胱移行上皮細胞EMT的影響,并探討NF-κB通路在EMT中的作用及姜黃素的干預效應。
  方法:
  首先通過MTT實驗篩選出對膀胱正常上皮細胞(SV-HUC-1 cells)沒有毒性的香煙懸液(cigarette smoking extract,CSE)濃度。
 ?。?)觀察CSE處理對SV-HUC-1細胞形態(tài)的影響,使用顯微鏡進行拍照并記錄。
 ?。?)利用細胞劃痕實驗和trans

3、well小室實驗觀察CSE處理對細胞的遷移和侵襲能力的變化,并用顯微鏡拍攝記錄。
  (3)CSE處理后,觀察細胞的上皮間質(zhì)轉化標志物蛋白及mRNA水平的變化,采用Western Blotting和qRT-PCR及免疫熒光的方法檢測。
 ?。?)接著應用Western Blotting檢測了CSE處理后細胞內(nèi)NF-κB通路標志性蛋白的變化。
 ?。?)繼而用NF-κB通路特異性抑制劑觀察其對CSE誘導的SV-HUC-1

4、細胞上皮間質(zhì)轉化作用的逆轉效果。
 ?。?)最后將CSE和姜黃素聯(lián)合處理細胞,觀察姜黃素對CSE引起的SV-HUC-1細胞上皮間質(zhì)轉化的逆轉作用。
  結果:
 ?。?)通過MTT檢測不同香煙懸液濃度下的細胞活性,我們發(fā)現(xiàn)1%時細胞活性下降至80%以下,存在統(tǒng)計學意義。最終選擇香煙懸液的濃度為選用0.1%,0.25%,0.5%做為實驗劑量。
 ?。?)將SV-HUC-1細胞暴露于選定的香煙懸液下7天后,觀察細胞形

5、態(tài),發(fā)現(xiàn)正常的膀胱移行上皮細胞呈現(xiàn)飽滿的圓形,橢圓形,細胞呈凝聚狀態(tài)。處理后細胞變成長梭形,形似蝌蚪狀,細胞之間較為分散。細胞劃痕實驗及 transwell小室實驗證明細胞的遷移及侵襲能力升高。
 ?。?)經(jīng)香煙懸液處理7天后, Western Blotting,qRT-PCR及免疫熒光檢測細胞的標志物。發(fā)現(xiàn)上皮標志物:E-Cadherin、ZO-1表達下降,間質(zhì)標志物:vimentin、N-cadherin表達上調(diào)。
  

6、(4)NF-κB通路激活,一定香煙懸液濃度下,隨著香煙懸液濃度增加,NF-κB特異性蛋白:p65,p50的核表達水平升高,胞質(zhì)中的磷酸化IKKα/β(phosphorylated IKKα/β)升高,而通路的抑制劑IκB持續(xù)降低。通過蛋白檢測證實當NF-κB通路活性被抑制劑PDTC有效抑制時,香煙懸液誘導的SV-HUC-1細胞上皮間質(zhì)化被成功逆轉。上皮標志物:E-Cadherin、ZO-1表達上調(diào),間質(zhì)標志物:vimentin、N-ca

7、dherin的表達下調(diào)。細胞形態(tài)及細胞的遷移侵襲能力被抑制。
  (5)姜黃素通過抑制NF-κB通路活性,達到抑制香煙懸液誘導的上皮間質(zhì)轉化作用的效果。通過蛋白及基因檢測,發(fā)現(xiàn)上皮蛋白表達水平上調(diào),間質(zhì)蛋白表達水平下降。
  結論:
  1、香煙懸液誘導膀胱移行上皮細胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉化。
  2、NF-κB通路在香煙懸液引起的上皮間質(zhì)轉化中起到重要的作用,為流行病學調(diào)查起到相互印證的作用,同時為分子靶向治療提供科

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論