復(fù)合養(yǎng)殖模式下不同來(lái)源氣單胞菌對(duì)苯扎溴銨的藥物敏感性及季銨鹽類耐藥基因分析.pdf

1、氣單胞菌（Aeromonas spp.）是水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中常見(jiàn)的條件致病菌，能夠引起細(xì)菌性疾病的爆發(fā)，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。苯扎溴銨消毒劑有著抗菌譜廣、有效濃度低、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，可以用于氣單胞菌病的防治，它也是“農(nóng)業(yè)部1435號(hào)公告”中，獲得批準(zhǔn)在水產(chǎn)生產(chǎn)中使用消毒劑之一。本研究對(duì)復(fù)合養(yǎng)殖模式下不同來(lái)源的氣單胞菌進(jìn)行了苯扎溴銨藥物敏感性測(cè)試和消毒劑耐藥基因檢測(cè)，以期了解不同來(lái)源氣單胞菌對(duì)苯扎溴銨的敏感性和消毒劑耐藥基因攜帶情況

2、，為苯扎溴銨在水產(chǎn)養(yǎng)殖中科學(xué)、有效的應(yīng)用提供參考。
　　以標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸桿菌（Escherichia coli ATCC25922）和嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila ATCC7966）為受試菌株，按照美國(guó)臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）的微量肉湯稀釋法的操作方法，測(cè)定不同菌液濃度和不同M-H（水解酪蛋白）肉湯濃度下的最小

3、抑菌濃度（Minimal Inhibitory Concentration，MIC）及最小殺菌濃度（Minimal Bactericidal Concentration，MBC）。結(jié)果顯示：細(xì)菌接種濃度在0.5×103CFU/mL～0.5×108CFU/mL之間變化時(shí)，受試菌株的MIC值隨細(xì)菌濃度變化的差異不明顯。當(dāng)MH肉湯濃度在10％～100%之間變化時(shí)，MIC值隨肉湯濃度變化的差異性亦不明顯。因此本研究采用CLSI推薦的微量肉湯稀釋

4、法（96孔板法）（介質(zhì)為M-H肉湯，而每孔中的菌液終濃度為0.5×106CFU/mL）作為進(jìn)一步開(kāi)展藥物敏感性實(shí)驗(yàn)的方法。
　　2013年06月從廣東省佛山市某一豬-魚(yú)復(fù)合養(yǎng)殖魚(yú)塘采集樣品，共篩選分離到121株氣單胞菌，分別來(lái)源豬糞（64株），池塘水（20株）、池塘底泥（14株）及魚(yú)體組織（23株）。采用微量肉湯稀釋法（96孔板法），對(duì)分離的121株菌株進(jìn)行MIC和MBC測(cè)定。結(jié)果顯示，苯扎溴銨對(duì)大腸埃希氏菌（ATCC25922）

5、的MIC值為8mg/L，對(duì)嗜水氣單胞菌（ATCC7966）的MIC值為16mg/L，對(duì)豬源受試菌株的MIC值范圍在8～128mg/L，對(duì)養(yǎng)殖池塘來(lái)源菌株的MIC范圍均在8～64mg/L。苯扎溴銨對(duì)豬源受試菌株的MIC50和MIC90值最低，分別為8.9mg/L和30.0mg/L；而魚(yú)源受試菌株的MIC50和MIC90值最高，分別為22.3mg/L和39.2mg/L。99.1%的受試菌株MBC/MIC比值≤4。MBC/MIC是表征消毒劑藥

6、效的重要指標(biāo)，表明苯扎溴銨對(duì)氣單胞菌仍具有良好的殺菌效果。但苯扎溴銨對(duì)受試菌株的MICs顯著大于“農(nóng)業(yè)部1435號(hào)公告”中的推薦使用濃度0.1～0.15mg/L。
　　根據(jù)現(xiàn)有的文獻(xiàn)報(bào)道，我們選擇了季銨鹽類（Quaternary ammonium compound，qac）耐藥相關(guān)基因中6種常見(jiàn)的qac基因，通過(guò)PCR的方法，檢測(cè)分析了121株氣單胞菌的季銨鹽耐藥相關(guān)基因。結(jié)果顯示：119株（98.4%）攜帶了qac基因，其中52

7、株（43.0%）攜帶2種qac基因；23株（19.0%）攜帶3種qac基因；25株（20.7%）攜帶4種qac基因；1株（0.8%）攜帶5種qac基因；qacA/B陽(yáng)性菌株的MIC50、MIC90分別為30.6mg/L、52.9mg/L，qacH陽(yáng)性菌株的MIC50、MIC90分別為32.0mg/L、64.0mg/L，相較于其它qac基因陽(yáng)性菌株的MIC50和MIC90高。qacA/B和qacH基因可能與氣單胞菌對(duì)苯扎溴銨的抗性產(chǎn)生有關(guān)