白念珠菌藥物敏感性試驗(yàn)及氟康唑相關(guān)耐藥基因點(diǎn)突變的研究.pdf

1、目的：了解白念珠菌對(duì)氟康唑和伊曲康唑的體外藥物敏感性。收集白念珠菌氟康唑耐藥株，檢測(cè)相關(guān)耐藥基因ERG11、TAC1、MRR1和UPC2的點(diǎn)突變，進(jìn)一步了解ERG11、TAC1、MRR1和UPC2的點(diǎn)突變與唑類藥物耐藥之間的關(guān)系。
　　 方法：收集不同來(lái)源臨床標(biāo)本，通過芽管形成試驗(yàn)、顯色培養(yǎng)基和厚膜孢子試驗(yàn)鑒定白念珠菌。采用M27-A2微量肉湯稀釋法，進(jìn)行白念珠菌對(duì)氟康唑和伊曲康唑的體外藥物敏感性試驗(yàn)。收集氟康唑耐藥株，采用尿素

2、裂解法提取DNA，PCR擴(kuò)增及測(cè)序。對(duì)于ERG11，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，測(cè)其全長(zhǎng)；對(duì)于TAC1設(shè)計(jì)三對(duì)引物，分別包括5個(gè)點(diǎn)突變T225A、A736V、N972D、N977D和G980E；對(duì)于MRR1，設(shè)計(jì)兩對(duì)引物，分別包括2個(gè)點(diǎn)突變P683S和G997V；對(duì)于UPC2，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，包括2個(gè)點(diǎn)突變A643T和G648D。將PCR產(chǎn)物送交商業(yè)測(cè)序。
　　 結(jié)果：共收集白念珠菌臨床株506株。白念珠菌對(duì)氟康唑的敏感率為99.21％(502

3、/506)，劑量依賴敏感率為0.20％(1/506)，耐藥率為0.59％(3/506)；對(duì)伊曲康唑的敏感率為43.28％(219/506)，劑量依賴敏感率為53.16％(269/506)，耐藥率為3.56％(18/506)；其中1株白念珠菌對(duì)氟康唑和伊曲康唑交叉耐藥。對(duì)于ERG11，11株白念珠菌氟康唑耐藥株的9株中檢測(cè)出了錯(cuò)義突變導(dǎo)致的8種氨基酸置換(突變率81.82％)，分別是E266D(n=5)、D116E(n=3)、Y132H(

4、n=2)、G448E(n=2)、Y132F(n=1)、K143Q(n=1)、T229A(n=1)和G464S(n=1)。其中K143Q此前未見文獻(xiàn)報(bào)道。對(duì)于UPC2，11株菌中的2株檢測(cè)出了錯(cuò)義突變導(dǎo)致的1種氨基酸置換(突變率18.18％)，G648D(n=2)。對(duì)于TAC1和MRR1，11株菌中均未檢測(cè)到相應(yīng)的點(diǎn)突變。
　　 結(jié)論：白念珠菌對(duì)唑類藥物有耐藥及交叉耐藥現(xiàn)象，伊曲康唑耐藥率高于氟康唑。但白念珠菌對(duì)氟康唑和伊曲康唑大