環(huán)境pH值對耐藥鮑曼不動桿菌藥物敏感性的影響及機(jī)制.pdf

1、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumanni,Ab)是醫(yī)院感染的重要病原菌,主要引起醫(yī)院獲得性肺炎,尤其以重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)發(fā)病率最高。近年來,隨著抗菌藥物上市時間的延長和臨床應(yīng)用的不斷推廣,鮑曼不動桿菌對常用抗菌藥物的耐藥性不斷增加。碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌(Carbapenem-resistant Acinetobacter baumanni,CRAB)的出現(xiàn),被認(rèn)為是二十一世紀(jì)耐藥領(lǐng)域的“哨兵事件”,其臨床檢出

2、率逐年增多。然而,細(xì)菌耐藥的增長速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過新的抗菌藥物的研發(fā)速度。CRAB常表現(xiàn)出泛耐藥的臨床特征,抗感染方案可選擇的抗菌藥物十分有限,臨床療效并不滿意,從而極大地延長了患者的住院時間,增加了患者的歸因死亡率。那么,在可選擇抗菌藥物匱乏的背景下,非抗菌藥物治療能否作為輔助治療措施而提高臨床療效呢?研究表明,健康人體的支氣管/肺泡灌洗液為弱堿性,當(dāng)肺部感染時則轉(zhuǎn)為酸性。其次,環(huán)境pH值變化對一些細(xì)菌的生物活性具有一定的影響。那么,環(huán)境p

3、H改變會導(dǎo)致CRAB生物學(xué)活性發(fā)生怎樣的變化?目前尚無研究報道。本課題完成了以下研究工作:
　　1、分析某綜合性醫(yī)院ICU鮑曼不動桿菌的分布規(guī)律及耐藥性變遷
　　目的:分析西京醫(yī)院近3年來所有?？艻CU患者各類感染標(biāo)本中鮑曼不動桿菌的分布及對抗菌藥物的耐藥情況,為指導(dǎo)臨床合理制定抗感染方案、增高療效提供理論依據(jù)。
　　方法:對2010年1月~2012年12月西京醫(yī)院所有?？艻CU患者各類感染性標(biāo)本分離的病原菌資料進(jìn)行回

4、顧性分析。
　　結(jié)果:4633株病原株中鮑曼不動桿菌1054株,2010~2012年其所占比例分別為20.57％、21.26%及25.94%。在標(biāo)本中的分布以痰液為主,占所有感染性標(biāo)本的80%以上。在藥敏結(jié)果中,鮑曼不動桿菌耐藥性最低的是多粘菌素B,其次為米諾環(huán)素和頭孢哌酮/舒巴坦;對其他抗菌藥物耐藥率均在60%以上,其中對亞胺培南和美羅培南耐藥率呈現(xiàn)逐年上升趨勢。
　　結(jié)論:鮑曼不動桿菌主要引起呼吸道感染,其對大部分臨床常

5、用抗菌藥物耐藥嚴(yán)重,治療上應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果選擇敏感的抗菌藥物,并加強(qiáng)抗菌藥物的合理使用。
　　2、環(huán)境pH值對碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌體外增殖活性的影響
　　目的:了解環(huán)境pH對CRAB體外增殖活性的影響,為臨床有效治療CRAB提供參考。
　　方法:收集臨床痰液標(biāo)本中分離出CRAB42株,分別用pH值為6.9、7.4和7.9的MH肉湯配制成5×105cfu/mL的菌液。將上述菌液分別加到滅菌的96孔平板中,每孔200μ

6、l。置于35℃溫箱中過夜培養(yǎng)20h,用酶標(biāo)儀于630nm處測定每孔的OD值。
　　結(jié)果:3種不同pH值的菌液培養(yǎng)20h,用酶標(biāo)儀所測OD均值分別為pH6.9組0.555±0.200、pH7.4組0.523±0.187、pH7.9組0.512±0.174。以pH6.9組作為對照,pH7.4及7.9組OD均值下降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05。
　　結(jié)論:環(huán)境pH值對CRAB的體外增殖活性有影響,與pH值為6.9的偏酸性環(huán)境相比,

7、pH值為7.4、7.9的堿性環(huán)境抑制了CRAB的體外增殖活性。
　　3、環(huán)境pH值對頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合米諾環(huán)素體外抗碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌敏感性的影響
　　目的:了解pH值對頭孢哌酮/舒巴坦(2:1,CSF)聯(lián)合米諾環(huán)素(MNO)在體外抗CRAB藥物敏感性的影響。
　　方法:42株CRAB及pH值為6.9、7.4和7.9的MH肉湯同實(shí)驗(yàn)2。采用棋盤法設(shè)計(jì),微量肉湯稀釋法測定在3種不同pH值MH肉湯中,不同濃度頭孢

8、哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素及兩者聯(lián)合對42株CRAB的最低抑菌濃度(MIC),并計(jì)算部分抑菌濃度(FIC)指數(shù)。
　　結(jié)果:在pH值由6.9升高到7.4及7.9時,兩藥單用,CSF的MICG值逐漸降低(各組P<0.05),而MNO的MICG值則逐漸升高(各組P<0.05);兩藥聯(lián)用,FIC指數(shù)≤1的百分比分別是23.81%、11.90%、28.59%,1　

9、　結(jié)論:在pH值7.9的堿性環(huán)境中,單用CSF或與MNO聯(lián)用的抗菌活性均增強(qiáng)。兩藥聯(lián)用對CRAB主要表現(xiàn)為無相關(guān)作用。
　　4、探討碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌耐藥的分子機(jī)制及環(huán)境pH值對其耐藥基因表達(dá)水平的影響
　　目的:了解西京醫(yī)院CRAB常見耐藥基因碳青霉烯酶OXA-23、OXA-51及外排泵系統(tǒng)adeB、外膜蛋白carO的攜帶情況,探討pH值對外排泵adeB及外膜蛋白carO基因表達(dá)量的影響。
　　方法:普通PC

10、R法檢測42株CRAB碳青霉烯酶OXA-23、OXA-51及外排泵系統(tǒng) adeB、外膜蛋白 carO,并進(jìn)行分析及測序;選取同時攜帶有 adeB、carO基因的CRAB10株及4株臨床Ab敏感株、1株標(biāo)準(zhǔn)株(ATCCBAA-747),用pH值分別為6.9、7.4、7.9的MH肉湯過夜培養(yǎng)20-24h,實(shí)時熒光定量PCR測定其adeB、carO基因的Ct值,用2-CT法計(jì)算各目的基因的相對表達(dá)量。
　　結(jié)果:42株CRAB carO

11、基因檢測發(fā)現(xiàn)40株陽性,陽性率為95.2%,adeB、OXA-23、OXA-51基因檢測陽性率均為100%。以標(biāo)準(zhǔn)株BAA-747作為對照,10株CRAB與4株臨床敏感株adeB基因相對表達(dá)量分別為:37.34±41.89、1.55±1.77;carO基因相對表達(dá)量分別為:0.38±0.34、4.80±3.87。與敏感株相比,CRAB adeB基因表達(dá)量增加,carO基因表達(dá)量下降,并且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05。不同pH值組間比較

12、,以pH值7.4組作為對照,pH值6.9組與pH7.9組adeB基因相對表達(dá)量為:1.20±3.23、1.26±0.97;carO基因相對表達(dá)量為:1.07±1.18、1.26±1.02。兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:產(chǎn)OXA-23、OXA-51型碳青霉烯酶以及外排泵adeB的過度表達(dá)、外膜蛋白carO表達(dá)的下降在本院大多數(shù)CRAB中同時存在,這種多種耐藥機(jī)制共存的現(xiàn)象是西京醫(yī)院下呼吸道感染CRAB廣泛耐藥的重

13、要原因。環(huán)境pH值在6.9、7.4、7.9時,對CRAB adeB、carO基因水平的表達(dá)無明顯影響。
　　上述研究結(jié)果表明,環(huán)境 pH值對 CRAB的體外增殖活性及藥物敏感性均有影響。與pH值為6.9的酸性環(huán)境相比,pH值為7.4、7.9的堿性環(huán)境抑制了CRAB的增殖活性。在pH值7.9的堿性環(huán)境中,單用CSF或與MNO聯(lián)用的抗菌活性均增強(qiáng)。環(huán)境pH值在6.9、7.4、7.9時,對CRAB adeB、carO基因水平的表達(dá)無明顯