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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
研究本地區(qū)志賀菌對(duì)氟喹諾酮類抗菌藥物敏感性降低的相關(guān)耐藥基因以及志賀菌的耐藥特征、分子流行病學(xué)研究。
材料與方法:
收集杭州市第一人民醫(yī)院2008年5月至2010年10月從門診腹瀉患者分離的153株志賀菌,經(jīng)法國(guó)生物梅里埃VITEKAMS鑒定儀鑒定和志賀菌血清學(xué)鑒定確認(rèn)。采用瓊脂稀釋法對(duì)153株志賀菌進(jìn)行藥物敏感性檢測(cè),采用PCR法檢測(cè)DNA旋轉(zhuǎn)酶A亞單位(gyrA)、拓?fù)洚悩?gòu)酶ⅣC亞單
2、位(parC)基因的喹諾酮類藥物耐藥決定區(qū)(QRDR),并對(duì)PCR結(jié)果進(jìn)行測(cè)序分析,同時(shí)用PCR法對(duì)質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類耐藥(PMQR)基因qnr和aac(6')-Ib-cr進(jìn)行篩選。利用脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)對(duì)菌株間的同源性進(jìn)行分析,通過(guò)接合實(shí)驗(yàn)證明耐藥基因位于質(zhì)粒上。
結(jié)果:
131株宋內(nèi)志賀菌對(duì)萘啶酸的耐藥率達(dá)100%,而對(duì)諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星全部敏感,對(duì)四環(huán)素、復(fù)方新諾明和氨芐西林的耐藥率分別為9
3、3.9%、92.8%和93.2%.94%的萘啶酸耐藥宋內(nèi)志賀菌株對(duì)氟喹諾酮類藥物敏感性出現(xiàn)下降。萘啶酸耐藥宋內(nèi)志賀菌菌株gyrA均發(fā)生單點(diǎn)突變,為83位絲氨酸→亮氨酸(Ser→Leu)突變,但parC未發(fā)生突變;未檢出質(zhì)粒介導(dǎo)PMQR基因qnr和aac(6')-Ib-cr基因。脈沖場(chǎng)凝膠電泳將131株宋內(nèi)志賀菌分為4個(gè)主要的克隆型。22株福氏志賀菌對(duì)萘啶酸的耐藥率達(dá)99%,除一株福氏志賀菌對(duì)萘啶酸、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星全部敏
4、感外,其余21株福氏志賀菌對(duì)氟喹諾酮類藥物敏感性全部出現(xiàn)下降,其中6株福氏志賀菌對(duì)環(huán)丙沙星耐藥。萘啶酸耐藥福氏志賀菌同時(shí)發(fā)生gyrA的83位絲氨酸→亮氨酸(Ser→Leu)和parC的80位絲氨酸→異亮氨酸(Ser→ILe)突變時(shí),才會(huì)造成萘啶酸耐藥福氏志賀菌對(duì)氟喹諾酮類藥物敏感性降低;在發(fā)生上述突變的基礎(chǔ)上,gyrA的87位天冬氨酸(Asp)被天冬酰胺(Asn)、甘氨酸(gly)、酪氨酸(Tyr)替代或qnr和aac(6')-Ib-c
5、r基因出現(xiàn)時(shí),萘啶酸耐藥福氏志賀菌才會(huì)對(duì)氟喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥。各有一株福氏志賀菌分別攜帶qnr和aac(6')-Ib-cr基因,PMQR基因均位于耐藥性質(zhì)粒上。脈沖場(chǎng)凝膠電泳將22株福氏志賀菌分為2個(gè)主要的克隆型。
結(jié)論:
萘啶酸耐藥宋內(nèi)志賀菌對(duì)氟喹諾酮類藥物敏感性降低非常普遍,其產(chǎn)生的主要機(jī)制為gyrA發(fā)生83位Ser→Leu替換。而萘啶酸耐藥福氏志賀菌已出現(xiàn)對(duì)氟喹諾酮類藥物耐藥,其產(chǎn)生的主要機(jī)制為gyr
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