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文檔簡介
1、青霉素是臨床上最易引發(fā)過敏反應的藥物之一,但它本身并沒有致敏性,引發(fā)過敏反應的最主要原因是青霉素制品中的大分子雜質,因此,去除致敏性大分子雜質對于降低青霉素過敏反應發(fā)生率具有重要意義。凝膠色譜法作為一種高效、易于操作的分離模式是分離青霉素中致敏性大分子雜質的有效手段。本文就凝膠色譜法分離的基礎理論和青霉素G鈉中致敏性雜質的分離去除工藝兩方面展開了深入的研究。
青霉素G鈉的不穩(wěn)定性將嚴重影響分離除雜的效果,為此研究了溶液種類
2、、緩沖液濃度、pH值以及溫度對青霉素G鈉穩(wěn)定性的影響。青霉素G鈉在不同溶液中的穩(wěn)定性順序依次為:檸檬酸鹽緩沖液>醋酸鹽緩沖液>磷酸鹽緩沖液>碳酸鈉溶液>0.9%氯化鈉溶液、5%葡萄糖溶液。在檸檬酸鹽緩沖液中,緩沖液與青霉素G鈉摩爾比大于0.75時有利于長時間保持穩(wěn)定性。較低的溫度和中性溶液有利于青霉素G鈉溶液的穩(wěn)定性。
采用Sephadex G-25、G-10凝膠,對青霉素G鈉中大分子雜質的分離條件進行了研究,考察了流動相
3、種類、緩沖液濃度、溫度對大分子雜質分離效果以及青霉素G鈉色譜行為的影響,討論了青霉素G鈉與凝膠之間的相互作用機理。青霉素G鈉在Sephadex凝膠上的色譜行為主要是體積排阻效應,但也存在溶質分子-凝膠之間吸附作用的次級效應。大分子雜質在G-10凝膠上的分離比在G-25凝膠上好,但青霉素G鈉在G-10凝膠色譜上峰形分布較寬。在G-10凝膠上較高上樣量的情況下,次級效應變得不明顯,大部分青霉素G鈉按照體積排阻效應被洗脫。
研究
4、了以Toyopearl HW-40F凝膠為分離介質對大分子雜質的分離。與G-10凝膠比較,HW-40F凝膠的柱效更高,對大分子雜質的分離效果更好,相同色譜條件下,青霉素G鈉與HW-40F凝膠之間的吸附作用更明顯。青霉素G鈉在凝膠上的吸附作用主要由疏水相互作用引起,高離子強度、低溶液pH值有利于洛質分子疏水作用的增強,進而增大吸附作用。采用較低濃度的中性檸檬酸鹽緩沖液做為流動相可以有效的分離青霉噻唑基類大分子雜質以及青霉噻唑酸,即使在上樣
5、量較大的情況下,分離效果也較好。
采用前沿分析法研究了緩沖液種類和濃度、溫度對青霉素G鈉在HW-40F凝膠上吸附平衡行為的影響。在不同溶液中,青霉素G鈉與HW-40F凝膠之間的吸附作用按照檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液的順序依次降低;緩沖液濃度越高吸附量越大;溫度越高吸附量越小.青霉素G鈉在0.005 mol/L檸檬酸鹽緩沖液中的吸附平衡數據可以用Freundlich方程擬合,擬合平均相對誤差為1.881%;在
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