葉酸靶向青霉素G酰化酶的實驗研究.pdf

1、目的：探討葉酸．青霉素G?；概悸?lián)物(F-PGA)是否對葉酸受體陽性細(xì)胞及實體腫瘤具有靶向作用，以及對該酶在體內(nèi)的藥代動力學(xué)進(jìn)行研究，為進(jìn)一步的葉酸靶向酶聯(lián)合前藥治療(FDEPT)奠定基礎(chǔ)。 方法：(1)用Iodogen法對F-PGA和PGA進(jìn)行1251標(biāo)記，經(jīng)高壓液相(HPLC)和紙層析法鑒定放化純度，用三氯醋酸(TCA)沉淀法行體外穩(wěn)定性監(jiān)測，并用對二甲氨基苯甲醛(PDAB)法測定酶活力。(2)用共聚焦顯微鏡觀察葉酸受體陽性

2、的宮頸癌HeLa細(xì)胞株和卵巢癌SKOV3細(xì)胞株以及葉酸受體陰性的肺癌A549細(xì)胞株攝取F-PGA或葉酸(F-A)隨時間變化的情況；并用放射配體結(jié)合分析法，檢測在37~C或4C下HeLa、SKOV3和A549細(xì)胞結(jié)合并內(nèi)化125I_F．PGA或125I_PGA隨時間及濃度的變化情況，并用Scatchard方法分析F-PGA與受體的親和力(用解離常數(shù)Kd表示)及最大結(jié)合位點數(shù)(Bmax)。(3)給荷HeLa腫瘤的裸鼠分別注射125I_F_P

3、GA、125I_PGA、125I．F．PGA+lOmgF-A和1251(給荷SKOV3腫瘤的裸鼠則分別注射125I_F．PGA和125I．PGA)后不同時間點，行SPECT顯像，并于24h顯像結(jié)束后解剖，對各臟器進(jìn)行稱重及測量放射性計數(shù)。計算腫瘤／健側(cè)肌肉(T／M)和腫瘤／非腫瘤組織(T／NT)的放射性計數(shù)比值等。(4)用同位素示蹤法研究125I．F．PGA和125I-PGA的藥代動力學(xué)性質(zhì)及其在正常小鼠體內(nèi)的分布，計算藥代參數(shù)(采用D

4、ASl．O軟件包)和各臟器的每克組織的百分注入劑量(％ID／g)。 結(jié)果：(1)125I．F．PGA和12SI_PGA的標(biāo)記率達(dá)90％，放化純度大于95％，體外穩(wěn)定性較好，且葉酸偶聯(lián)和1251標(biāo)記對酶的活性損傷都較小。(2)F-PGA或F-A可被HeLa和SKOV3細(xì)胞攝取，而不能被A549細(xì)胞攝取，且這種選擇性的攝取隨時間的增加而增加直至達(dá)到飽和。125I_F．PGA亦能被HeLa或SKOV3細(xì)胞結(jié)合并內(nèi)化，且呈時間、溫度和濃

5、度的依賴性及飽和性，還能被葉酸所競爭抑制，而12SI．PGA不能與HeLa細(xì)胞特異性結(jié)合，125I．F．PGA也不與A549細(xì)胞結(jié)合。在4℃下，125I-F-PGA與HeLa和SKOV3細(xì)胞膜上葉酸受體的Kd分別為O．1lnmol／L和0．25nmol／L，Bmax分別為0．48x104個／細(xì)胞和1．03×104個／細(xì)胞，而在37'C下，受體參與內(nèi)化和循環(huán)過程，使膜上有效受體結(jié)合位點數(shù)增加一倍。(3)注射125I-F-PGA組的SPEC

6、T顯像，可見腫瘤部位有明顯的放射性濃聚影，其T／M值．時間曲線明顯高于其余各組的T／M值．時間曲線，用統(tǒng)計學(xué)分析亦有顯著差異(P