下尿路梗阻后膀胱結(jié)構(gòu)重塑及功能障礙的研究.pdf

1、目的：下尿路梗阻導(dǎo)致的膀胱功能障礙是臨床治療的難點(diǎn)和研究的熱點(diǎn)。目前對(duì)一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)和一氧化氮(NO)在正常及梗阻膀胱中的作用機(jī)制仍有爭(zhēng)議。本研究通過(guò)建立大鼠膀胱出口不全性梗阻(partial bladder outlet obstruction，PBOO)模型，研究NOS各亞型在膀胱組織中的表達(dá)、膀胱結(jié)構(gòu)重塑及功能障礙、氧化應(yīng)激損害三者之間的關(guān)系，探討NOS作為保護(hù)梗阻性膀胱功能治療

2、靶點(diǎn)的可行性。
　　 方法：
　　 1.24只SD雄鼠隨機(jī)分為四組：正常(NORMAL)及假手術(shù)對(duì)照組(SHAM)、膀胱出口不全性梗阻3周(PBOO3W)和6周(PBOO6W)組。以尿道外支架法建立PBOO模型。各組大鼠均接受麻醉下在體膀胱測(cè)壓評(píng)價(jià)膀胱功能，膀胱稱重和膀胱肌肉膠原纖維染色(Masson染色)評(píng)價(jià)膀胱肥大纖維化程度，客觀反映梗阻造成的膀胱結(jié)構(gòu)重塑和功能障礙。
　　 2.通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR(Q-PCR

3、)檢測(cè)NOS mRNA在膀胱組織中的表達(dá)變化，免疫組織化學(xué)染色定位NOS蛋白，免疫印記(westernblotting)檢測(cè)NOS單體和二聚體表達(dá)情況，分光光度法檢測(cè)NOS亞型活力及氧化應(yīng)激損害水平，探討NOS、膀胱結(jié)構(gòu)重塑及功能障礙、氧化應(yīng)激損害三者之間的關(guān)系。
　　 3.對(duì)梗阻3周(PBOO3W)已經(jīng)形成膀胱結(jié)構(gòu)重塑及功能障礙的SD大鼠給予NOS輔助因子四氫生物蝶呤(BH4)、NO供體L-精氨酸(L-arg)、抗氧化劑Vit

4、-C干預(yù)3周，通過(guò)上述功能學(xué)、形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)指標(biāo)，探討NOS作為保護(hù)梗阻膀胱功能治療靶點(diǎn)的可行性。
　　 結(jié)果：
　　 1.與對(duì)照組相比，梗阻導(dǎo)致膀胱重量顯著性增加(P<0.05)和膀胱重量與體重的比值明顯增加(P<0.05)；Masson染色顯示梗阻膀胱肌肉肥大膠原纖維沉積增多；梗阻導(dǎo)致顯著性的最大排尿壓降低、殘余尿量增加(P<0.05)、排尿間隔延長(zhǎng)和排泄容積增加，PBOO6W組甚至出現(xiàn)充盈性排尿。
　　

5、 2.Q-PCR、免疫組化及western blotting均未在膀胱組織中檢測(cè)到神經(jīng)型NOS(nNOS)表達(dá)。Q-PCR結(jié)果顯示梗阻導(dǎo)致膀胱組織中誘導(dǎo)型NOS(iNOS)、內(nèi)皮型NOS(eNOS)mRNA表達(dá)降低；western blotting顯示梗阻膀胱組織中變性iNOS和eNOS單體表達(dá)下降但與對(duì)照組之間沒(méi)有明顯差異(P>0.05)，非變性的eNOS單體與單體二聚體之和的比值明顯增加(P<0.05)即eNOS解耦連失活增多。梗阻

6、膀胱組織中丙二醛(MDA)水平明顯升高、過(guò)氧化物歧化酶(SOD)活性明顯降低(P<0.05)，氧化應(yīng)激損害加重。
　　 3.與PB006W、L-arg、Vit-C組相比，BH4干預(yù)導(dǎo)致膀胱重量、膀胱重/體重較輕(P<0.05)，肌肉肥大膠原纖維沉積較輕，膀胱殘余尿量降低、最大收縮壓和排尿量明顯增加(P<0.05)，eNOS單體與單體二聚體之和的比值顯著性降低(P<0.05)即eNOS再耦連增多或解耦連減少，氧化應(yīng)激損傷較輕(P<