高良姜素抑制骨肉瘤細胞及其機制.pdf

1、背景：
　　骨肉瘤是惡性骨腫瘤中最常見的腫瘤之一。它常發(fā)生于年輕患者。骨肉瘤細胞增殖比較快，并且易于侵襲周圍組織。當前的抑制該腫瘤進展的主要治療方案為手術切除并加以新輔助化療。但化療藥物存在副作用，這限制了其長期使用。之前有研究報道，高良姜素可抑制多種腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲能力，但是否能抑制骨肉瘤細胞還不清楚。
　　目的：
　　該研究的目的是探究高良姜素對骨肉瘤細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的影響，并探索高良姜素

2、作用于骨肉瘤細胞的潛在機制。
　　方法：
　　1.通過MTT實驗來評估高良姜素對骨肉瘤細胞的增殖的影響。用紫外分光儀檢測OD值，檢測的波長為570納米。最后用SPSS19.0軟件統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，并且計算半數(shù)致死劑量(LC50)。
　　2.分別用Hoechst33258染色和細胞流式計數(shù)來評估高良姜素對骨肉瘤細胞的凋亡的影響。在前一實驗中，細胞經染色后直接在光學顯微鏡下觀察并計數(shù)。細胞核為亮藍色的細胞代表已發(fā)生凋亡的細胞。

3、在后一實驗中需要用到Annexin V-FITC/PI細胞凋亡試劑盒，然后用FACScan細胞流式儀檢測結果。標記為Annexin V(+)/PI(-)的細胞被認為屬于早期凋亡細胞。而標記為Annexin V(+)/PI(+)的細胞被認為屬于晚期凋亡細胞。
　　3.分別用劃痕實驗和穿膜實驗來評估高良姜素對骨肉瘤細胞的遷移和侵襲的影響。在前一實驗中，在種有骨肉瘤細胞的6孔板上劃出等寬的劃痕，然后分別在孵育24小時和48小時后，將6孔

4、板置于倒置顯微鏡下觀察拍照并計算劃痕的寬度。在后一實驗中需要用Transwell孔板。將骨肉瘤細胞種于Transwell小孔的上表面，孵育48小時后在倒置顯微鏡下觀察Transwell小孔下表面上的細胞，拍照并計算細胞個數(shù)。
　　4.用蛋白質印記的方法來評估受高良姜素處理后的骨肉瘤細胞中與細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲相關的調控因子的蛋白表達水平的變化。蛋白條帶用LAS-4000科學成像系統(tǒng)曝光，最后用Image J軟件分析數(shù)據(jù)。

5、r>　　結果：
　　MG63和U20S細胞經高良姜素處理后，兩種骨肉瘤細胞的增殖能力都顯著下降。MG63細胞經高良姜素處理后，其細胞凋亡顯著地增加了。MG63細胞的遷移和侵襲能力也顯著地下降了。與此同時，MG63細胞中的PI3K和Aktp-Thr308的蛋白表達量明顯下降了，但Akt總蛋白的表達量沒有改變。位于PI3K和Akt下游的調控因子Cyclin D1、MMP-2和MMP-9的蛋白表達量均下降，而p27Kip1、caspas