肺結(jié)核患者痰液及血清microRNA-144水平變化研究.pdf

1、研究背景：
　　結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病。結(jié)核病歷史悠久，在七干多年前的新石器時(shí)代的人類骨化石上就被發(fā)現(xiàn)有脊柱結(jié)核的蹤影。結(jié)核分枝桿菌可以侵犯許多器官，最常見(jiàn)的是肺結(jié)核，它是危害人類健康的重要疾病之一。世界衛(wèi)生組織(WHO)2016年全球報(bào)告統(tǒng)計(jì)，在2015年全世界大約有10，400，000例新發(fā)結(jié)核病患者，中國(guó)有918，000例，其中女性296，000例，男性622，000例，其病死率為4％。近些年來(lái)，隨著流動(dòng)人口

2、的增加，在結(jié)核菌病治療方面又遇到了兩大較為突出的難題，那就是耐藥結(jié)核病和結(jié)核病伴有HIV感染患者的治療。2015年中國(guó)數(shù)據(jù)顯示已知耐多藥肺結(jié)核(MDR-TB)和耐利福平肺結(jié)核(RR-TB)患者約57000例，結(jié)核病伴有HIV陽(yáng)性患者10034例，而接受正規(guī)治療的有3750例，僅占37％。這兩類患者不僅治療費(fèi)用昂貴，而且治療效果差，且易引起傳播，是目前結(jié)核病防治的重點(diǎn)。中國(guó)是全球結(jié)核病負(fù)擔(dān)較重國(guó)家之一，在相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)排名一直居于第二位，2

3、015才降為第三位，一方面說(shuō)明了中國(guó)政府對(duì)結(jié)核病的重視和投入，并收到了一定的效果，另一方面也說(shuō)明了中國(guó)結(jié)核病疫情的嚴(yán)峻性。在2016年中國(guó)政府投入結(jié)核病的經(jīng)濟(jì)花費(fèi)大約為3720萬(wàn)美元，折合人民幣約為大約250080萬(wàn)，這對(duì)于中國(guó)來(lái)說(shuō)是個(gè)龐大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
　　糖尿病和肺結(jié)核一樣都是嚴(yán)重威脅人類健康的慢性疾病。隨著人們生活飲食方式的變化，比如更多的年輕人作息不規(guī)律、熬夜、飲食不健康、久坐、活動(dòng)減少，以及老齡化人口增多、肥胖癥患者的增加

4、，糖尿病的發(fā)病率逐年增高。2015年國(guó)際糖尿病聯(lián)盟(IDF)在糖尿病全球報(bào)告里詳細(xì)展示了目前全球糖尿病患病情況和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。2015年全球糖尿病患者人數(shù)高達(dá)4.15億，患病率為8.8％。其中75％的患者分布在中低收入國(guó)家。估計(jì)2040年全球糖尿病患者數(shù)將達(dá)6.42億，患病率將上升至10.4％(大致范圍8.5％-13.5％)。
　　糖尿病患者感染肺結(jié)核的風(fēng)險(xiǎn)是普通人群的3倍。主要原因可能與糖尿病患者糖、蛋白、脂肪代謝紊亂，使得患者的營(yíng)

5、養(yǎng)狀態(tài)變差，抵抗力下降，同時(shí)受損組織的修復(fù)能力越來(lái)越差，長(zhǎng)期處于一種免疫力低下的狀態(tài)。同時(shí)血液及組織內(nèi)糖量增多，甘油產(chǎn)物的蓄積，是細(xì)菌的良好培養(yǎng)基，而肺部血容量豐富，亦有利于結(jié)核菌的生長(zhǎng)繁殖?；加薪Y(jié)核病的糖尿病患者的血糖往往偏高，難以良好控制。而在患糖尿病的肺結(jié)核患者中，經(jīng)過(guò)抗結(jié)核治療后，血糖會(huì)隨著治療的時(shí)間逐漸下降，部分在發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核時(shí)確診的糖尿病患者在抗結(jié)核治療結(jié)束后血糖可降至正常。所以糖尿病和肺結(jié)核的發(fā)生互相影響，存在互為因果的關(guān)系

6、，并互相影響治療效果。
　　近些年來(lái)，關(guān)于microRNA的研究越來(lái)越多。MicroRNA(miRNA)是一種機(jī)體內(nèi)源性表達(dá)的單鏈小分子RNA，位于基因組非編碼區(qū)，在細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、死亡等生物過(guò)程中起著重要的作用，長(zhǎng)度為18～25核苷酸。由60～110nt的可以形成發(fā)夾狀的內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄前體加工而成。
　　眾多文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，miR-144在結(jié)核病患者中表達(dá)上調(diào)，并且能在患者的血清、痰液和胸腔積液中均能檢測(cè)到。所以本文選擇miR

7、-144進(jìn)行研究。miR-144在其他的許多領(lǐng)域已經(jīng)有眾多的研究，比如miR-144是紅系分化的重要調(diào)控因子，參與了許多癌癥的發(fā)病，包括結(jié)腸癌、胰腺癌、喉癌、惡性間皮瘤、骨肉瘤的發(fā)病。
　　miR-144在結(jié)核感染過(guò)程中的機(jī)制已有眾多發(fā)現(xiàn)，總結(jié)歸納后發(fā)現(xiàn):miR-144主要在T細(xì)胞中表達(dá)，并參與管理T細(xì)胞免疫功能，它能抑制兩種主要的免疫因子γ-干擾素和腫瘤壞死因子-α的產(chǎn)生，所以miR-144能阻止T細(xì)胞的增殖，導(dǎo)致結(jié)核桿菌病原體

8、清除困難，在結(jié)核感染系統(tǒng)扮演了重要角色。
　　在關(guān)于糖尿病的研究中發(fā)現(xiàn)miR-144不僅僅通過(guò)蛋白調(diào)控影響胰島素基因的表達(dá)，又能作用于肝臟、脂肪、骨骼肌等胰島素的靶受體。胰島素受體底物蛋白1(IRS1)是它的靶基因，通過(guò)調(diào)控IRS1表達(dá)的控制因子，使其表達(dá)下調(diào)，從而影響胰島素的功能，產(chǎn)生胰島素抵抗。miR-144在糖尿病患者的外周血中明顯升高，所以miR-144可以作為一個(gè)糖尿病生物學(xué)標(biāo)記物。
　　基于以上考慮，來(lái)做這項(xiàng)研究

9、，進(jìn)一步探討miR-144在肺結(jié)核病和肺結(jié)核合并糖尿病的診斷和療效評(píng)價(jià)中的應(yīng)用價(jià)值。
　　研究目的：
　　1.觀察肺結(jié)核病患者治療前后痰液及血清miR-144水平變化，探討miR-144在肺結(jié)核患者中的診斷價(jià)值。
　　2.觀察肺結(jié)核合并糖尿病患者與無(wú)糖尿病患者痰液及血清miR-144水平變化。
　　3.觀察miR-144與γ-干擾素的水平變化之間的關(guān)系，對(duì)miR-144參與結(jié)核感染過(guò)程機(jī)制進(jìn)行探討。
　　研

10、究方法：
　　收集124例肺結(jié)核病患者入實(shí)驗(yàn)組，分為A、B、C三組。其中，A組為痰菌陽(yáng)性伴有空洞患者，共53例;B組:為痰菌陰性伴有空洞患者，共20例;C組:為痰菌陰性無(wú)空洞患者，共51例。
　　124例肺結(jié)核患者中有糖尿病患者53例，無(wú)糖尿病患者71例。兩組的年齡和性別均無(wú)顯著性差異（P值均＞0.05）。
　　治療6個(gè)月后，124例患者中失訪17例，剔除10例，其中5例出現(xiàn)肝功能損害;3例出現(xiàn)白細(xì)胞顯著減少;2例出現(xiàn)

11、藥物性皮疹。
　　研究結(jié)果：
　　1.總體比較
　　1.1 治療前肺結(jié)核患者的痰液和血清miR-144均比對(duì)照組高(P均＜0.001);
　　1.2 治療1個(gè)月后肺結(jié)核患者的痰液和血清miR-144均較治療前顯著下降（P均＜0.05）;治療6個(gè)月后痰液和血清miR-144較治療1個(gè)月時(shí)顯著下降（P均＜0.05）。
　　1.3 治療6個(gè)月后肺結(jié)核患者的痰液和血清miR-144仍然高于健康對(duì)照組（P均＜0.00

12、1）。
　　2.實(shí)驗(yàn)組A、B、C三組組間比較
　　2.1 治療前痰液和血清miR-144水平比較:A、B、C組均高于對(duì)照組;A組高于B組和C組，B組高于C組（P均＜0.05）
　　2.2 治療1個(gè)月后痰液和血清miR-144下降水平比較:A組及B組均下降顯著（P均＜0.05），C組下降不明顯(P＞0.05)。
　　2.3 治療1個(gè)月后痰液的miR-144水平比較:A和B組均顯著高于C組及對(duì)照組（P均＜0.05）。

13、然而C組治療1個(gè)月后與對(duì)照組比較，痰液的miR-144無(wú)顯著差別(P＞0.05)。治療1個(gè)月后血清的miR-144比較:A、B、C三組均高于對(duì)照組（P均＜0.05）。
　　2.4 治療6個(gè)月后，在痰液組，A組和B組之間、C組與B組比較差異無(wú)明顯差異（P均＞0.05），A組比C組明顯偏高(P＜0.05);在血清組，A組和B組之間、C組與B組之間、A組與C組之間比較無(wú)明顯差異（P均＞0.05）
　　3.病情好轉(zhuǎn)組和病情無(wú)好轉(zhuǎn)組比

14、較
　　3.1 病情好轉(zhuǎn)的患者在治療后痰液和血清miR-144的表達(dá)是顯著下降的(P均＜0.001)。
　　3.2 病情無(wú)好轉(zhuǎn)的患者治療后痰液和血清miR-144的表達(dá)無(wú)顯著變化(P＞0.05，P-0.891)。
　　3.3 治療1個(gè)月后A、B、C三組病情好轉(zhuǎn)患者以及A組病情無(wú)好轉(zhuǎn)患者痰液和血清miR-144均顯著下降（P均＜0.001）。
　　3.4 C組病情無(wú)好轉(zhuǎn)的患者，痰液和血清miR-144是上調(diào)的(P均

15、＜0.05)，而B(niǎo)組病情無(wú)好轉(zhuǎn)的患者，痰液和血清miR-144無(wú)明顯變化（P均＞0.05）。
　　4.特異度和敏感度測(cè)定
　　4.1 痰液miR-144ROC分析顯示AUC是0.954(95％CI(0.925，0.983)，P＜0.001)。當(dāng)cut-off值為1.185，敏感度為86.29％，特異度為99.15％，均為最高點(diǎn)。
　　4.2 血清miR-144ROC分析顯示AUC是0.997(95％CI(0.993，1

16、.000)，p＜0.001)。當(dāng)cut-off值為0.848，敏感度為99.19％，特異度為94.87％，均為最高點(diǎn)。
　　5.無(wú)論是治療前還是治療1個(gè)月后，肺結(jié)核合并糖尿病組患者的痰液和血清miR-144水平均比無(wú)糖尿病肺結(jié)核組顯著升高（P均＜0.01）。
　　研究結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)的ROC曲線結(jié)果證明無(wú)論是痰液和血清miR-144在肺結(jié)核病的診斷方面都有很高的靈敏度以及特異度。這表明miR-144可以作為肺結(jié)核

17、病的輔助診斷指標(biāo)。
　　2.實(shí)驗(yàn)組患者較健康對(duì)照組痰液及血清miR-144水平是顯著上調(diào)的;但是在抗結(jié)核治療1個(gè)月以及6個(gè)月后會(huì)顯著下降。表示miR-144隨著結(jié)核病治療的好轉(zhuǎn)是逐漸下降的。
　　3.抗結(jié)核治療前痰液和血清miR-144檢測(cè)結(jié)果提示，A組顯著高于B組、C組，B組顯著高于C組，表明miR-144在痰涂片陽(yáng)性并伴有空洞的嚴(yán)重肺結(jié)核患者中顯著偏高，能判斷結(jié)核病的嚴(yán)重程度。
　　4.在治療1個(gè)月后:病情好轉(zhuǎn)組患