超聲輔助提取枳椇多糖及其化學結(jié)構(gòu)與免疫活性研究.pdf

1、枳椇Hovenia dulcis（鼠李科），俗稱拐棗，為藥食兩用植物果實。枳椇多糖具有抗急性酒精性肝損傷、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)以及抗腫瘤等生物活性。本文選用枳椇肉質(zhì)果梗為原料，經(jīng)提取優(yōu)化制備枳椇多糖，對多糖進行分離純化得到均一組分并且對均一組分多糖的理化性質(zhì)、化學結(jié)構(gòu)以及免疫活性進行了研究，主要研究方法及結(jié)果如下:
　　(1)枳椇多糖超聲輔助提取工藝的優(yōu)化:在單因素實驗的基礎(chǔ)上，采用三因素三水平的BBD響應(yīng)面優(yōu)化的方法研究了提取溫度、

2、超聲功率、提取時間對枳椇多糖提取率的影響，優(yōu)化條件為:超聲溫度60℃，超聲功率362W，提取時間65min，在此條件下多糖的提取率最高為25.12mg/g。
　　(2)枳椇粗多糖的醇沉分級以及它們的初步結(jié)構(gòu)表征與體外抗氧化活性的研究:枳椇粗多糖HDPs濃縮以后用不同濃度的乙醇（40％、60％和80％）進行醇沉分級得到三個級分HDPs1、HDPs2和HDPs3。研究了分級醇沉片段的理化性質(zhì)、紅外光譜、單糖組成及其體外抗氧化活性，結(jié)果

3、表明，HDPs1、HDPs2和HDPs3的糖醛酸含量分別為:2.35±0.03％，11.1±0.05％和2.15±0.08％;蛋白質(zhì)含量分別為:2.37±0.05％，5.98±0.16％和11.77±0.35％。它們都有較好的DPPH和ABTS自由基的清除活性，但清除能力有所不同;三個級分的紅外圖譜有相似的吸收峰，GC分析這三個醇沉級分的單糖組成主要由阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖和半乳糖組成，但含量不同，導(dǎo)致了體外抗氧化活性的差異;HDPs

4、2和HDPs3較HDPs1具有較強的體外抗氧化活性。
　　(3)枳椇多糖的分離純化以及均一組分多糖的理化性質(zhì)測定和結(jié)構(gòu)表征:枳椇粗多糖HDPs經(jīng)纖維素DEAE-52柱層析分離得到三個組分為HDP1、HDP2、HDP3; HDP3經(jīng)濃縮，蒸餾水透析，冷凍干燥，再通過葡聚糖凝膠柱S-300進一步分離純化，經(jīng)高效液相測定獲得的HDP3A為均一組分多糖。通過理化性質(zhì)測定發(fā)現(xiàn)枳椇多糖HDP3A的糖醛酸含量高達45.9％，是一種酸性多糖，沒有

5、蛋白質(zhì)的存在;HDP3A的結(jié)構(gòu)表征由紅外光譜、紫外光譜、單糖組成、HPLC、甲基化、GC-MS和NMR獲得;單糖組成實驗表明HDP3A多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、巖藻糖、半乳糖、木糖、甘露糖和葡萄糖組成;高效液相測得其分子量約為3.65×105Da。通過核磁共振13C-NMR、1H-NMR和HSQC譜分析以及甲基化與GC-MS分析，結(jié)果表明其糖苷鍵的連接方式為:1，4-linked Rhap、1，3，6-linkedManp、1-linke

6、d Xylp、1,4-linked GalA、1,6-linked Fucp、1,4,6-linked Glcp、1-linkedAraf其摩爾比為1.0∶0.7∶0.4∶11.7∶0.5∶0.5∶0.8，其中1，4-linked GalA為主鏈。
　　(4) HDP3A、HDP3A-0.1、HDP3A-0.5和HDP3A-R的體外免疫調(diào)節(jié)活性的研究:測定了枳椇多糖四個組分在不同濃度(20-500ug/mL)時對巨噬細胞免疫活性的