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文檔簡介
1、我國竹資源豐富,竹材加工業(yè)發(fā)達,目前竹子的開發(fā)利用正處于從生產(chǎn)、生活、工業(yè)用材向健康產(chǎn)品轉(zhuǎn)變的重要階段。竹茹是竹子的外表皮部分,是竹材加工中“刮青”環(huán)節(jié)產(chǎn)生的大宗副產(chǎn)物,目前尚未得到有效的開發(fā)利用。本文以竹茹為研究對象,瞄準(zhǔn)其中的半纖維素多糖成分,對其進行分離純化、結(jié)構(gòu)解析及體內(nèi)外免疫活性的系統(tǒng)評價,旨在為竹茹多糖作為免疫功能因子的開發(fā)和竹材加工副產(chǎn)物的高值轉(zhuǎn)化提供理論依據(jù)和實踐指導(dǎo)?,F(xiàn)將主要研究結(jié)果歸納如下:
1.采用蒸汽爆
2、破(簡稱汽爆)預(yù)處理聯(lián)合水熱抽提法提取竹茹多糖,研究了不同汽爆條件對竹茹多糖得率的影響。結(jié)果顯示,隨著蒸汽壓力和維壓時間的增加,竹茹多糖得率呈先上升后下降的變化趨勢;當(dāng)蒸汽壓力為2.2 MPa、維壓時間為1 min時,竹茹多糖的得率達到最大值[2.05%±0.22%(以脫蠟樣品干重計)],是未經(jīng)處理對照樣的6.7倍,表明汽爆預(yù)處理能夠顯著促進竹茹中結(jié)構(gòu)性多糖的釋放,使得多糖得率大幅度提高。
2.采用DEAE-Sepharose
3、 Fast Flow陰離子交換柱對優(yōu)化條件下制得的竹茹多糖BSP(多糖含量90.2%)進行分離純化,得到一個中性多糖組分BSP-1(多糖含量95.3%)和一個酸性多糖組分BSP-2(多糖含量92.5%),二者的得率分別為1.06%和0.79%(以脫蠟的汽爆樣品干重計)。利用化學(xué)法和波譜法對BSP-1和BSP-2的一級結(jié)構(gòu)進行解析,推測:
(1) BSP-1為乙?;陌⒗揪厶?Mw:12,800 g/mol),即:以β-1,
4、4-D-木糖為骨架,約8.4%木糖基的C-2位被乙?;〈?,22.8%木糖基的C-3位被乙?;〈?.2%木糖基的C-3位上連接有α-L-阿拉伯糖基,示意如下:
(2) BSP-2為乙酰化的4-甲氧基-葡萄糖醛酸阿拉伯木聚糖(Mw:11,300g/mol),即:以β-1,4-D-木糖為骨架,約7.0%木糖基的C-2位被乙?;〈?,6.4%木糖基的C-2位上連接有4-甲氧基-α-D-葡萄糖醛酸基,18.1%木糖基的C-3位被乙
5、?;〈?,3.2%木糖基的C-3位上連接有α-L-阿拉伯糖基,另還有約1.4%木糖基的C-2位和C-3位同時被乙?;〈?,示意如下:
采用原子力顯微鏡對BSP-1和BSP-2的空間構(gòu)象進行觀測,顯示在10μg/mL濃度下,BSP-1糖鏈相互盤繞呈線團狀,BSP-2糖鏈相互盤繞呈微球狀;在1μg/mL濃度下,測得BSP-1糖鏈的主鏈長度約1400nm,寬度為20~70nm,高度為1.3~2.5 nm,支鏈長度為300~400 n
6、m; BSP-2糖鏈的主鏈長度約2200nm,寬度為30~80nm,高度為1.0~2.8 nm,支鏈長度為200~300nm。
3.體外免疫試驗結(jié)果表明,BSP-1對小鼠脾淋巴細胞增殖基本無影響,而BSP、BSP-2能刺激小鼠脾淋巴細胞增殖,并對經(jīng)刀豆蛋白A(ConA)或脂多糖(LPS)適度刺激的淋巴細胞增殖有促進作用;BSP、BSP-1和BSP-2對RAW264.7巨噬細胞增殖無明顯影響,但能顯著提高其吞噬中性紅及分泌NO的
7、能力,且呈明顯的劑量和時間依賴性。
4.整體動物試驗結(jié)果表明,連續(xù)灌胃100或200 mg/kg BW/day劑量的BSP兩周能夠明顯改善環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能,且效果與50 mg/kgBW/day劑量的香菇多糖(陽性對照)接近。BSP對免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用主要體現(xiàn)在:(1)可顯著增加免疫低下小鼠的骨髓有核細胞、外周血白細胞、淋巴細胞(B淋巴細胞)計數(shù),并降低其骨髓嗜多染紅細胞微核率;(2)可顯著提高免疫低下
8、小鼠單核/巨噬細胞的吞噬功能(碳廓清能力)和體液免疫應(yīng)答反應(yīng)(血清溶血素及免疫球蛋白的生成),并增強其脾淋巴細胞增殖能力和NK細胞殺傷活性;(3)可顯著上調(diào)免疫低下小鼠脾淋巴細胞Th1/Th2轉(zhuǎn)錄因子T-bet/GATA-3的mRNA表達水平,從而促進Th1/Th2細胞因子(IL-2、IL-12、TNF-α、INF-γ/IL-4)的分泌。此外,連續(xù)灌胃200 mg/kg BW/day劑量的BSP兩周能夠顯著提高正常小鼠的免疫功能,表現(xiàn)為
9、:顯著上調(diào)正常小鼠脾淋巴細胞Th1/Th2轉(zhuǎn)錄因子T-bet/GATA-3的mRNA表達水平及Th1/Th2細胞因子(IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ/IL-4、IL-10)的分泌水平、促進正常小鼠脾淋巴細胞增殖能力和體液免疫應(yīng)答反應(yīng)(血清溶血素及免疫球蛋白的生成)。因此,BSP對免疫低下小鼠和正常小鼠均有顯著的免疫調(diào)節(jié)作用,具有作為免疫促進劑開發(fā)的潛力。鑒于我國極其豐富的竹類資源及其巨大的加工副產(chǎn)物總量,從竹茹中挖掘天然來
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