川明參多糖的提取工藝及其免疫活性研究.pdf

1、川明參屬傘形科川明參屬，在形態(tài)上與明黨參相近，是我國特有的單種屬植物，主要分布在四川，多為栽培，其干燥根為四川常用道地中藥材及滋補食品。研究表明，具有潤肺化痰、和胃、生津、解毒等功效，主治肺熱咳嗽、熱病傷陰，為滋陰要藥。實驗室前期研究表明，川明參多糖硫（Chuanmingshen ViolaceumPolysaccharides，CVP）酸化后具有抗病毒作用，本次研究對川明參多糖提取工藝、體內(nèi)外免疫活性進行了系統(tǒng)的研究。
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2、川明參多糖提取工藝研究本研究采用苯酚-硫酸法和DNS法相結(jié)合對多糖定量;CVP最佳提取工藝通過單因素試驗和正交試驗進行確定。結(jié)果顯示:CVP的最佳提取工藝為提取溫度為100℃，提取時間為4h，料液比為1∶30，粉碎粒度為80目。結(jié)果表明，本研究得到的提取、純化干燥方法高效、簡便、成本低，且采用本方法純化干燥得到多糖純度達93.85％。
　　2.川明參多糖及其硫酸化物對小鼠脾淋巴細胞增殖活性的影響本研究采用四甲基偶氮唑鹽(3-(4，

3、5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltet-razolium bromide，MTT)法檢測不同濃度的CVP及SCVP對靜息期細胞、伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A，ConA)處理細胞、脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）處理細胞的增殖情況。結(jié)果顯示:與對照組相比較，CVP各濃度對靜息期細胞和LPS處理細胞的增殖均無顯著影響，但與ConA具有協(xié)同增殖作用;SCVP能活化淋

4、巴細胞促進其顯著增殖，與ConA和LPS具有協(xié)同增殖作用，并有一定的量效關(guān)系。結(jié)果表明，CVP及SCVP能促進小鼠脾淋巴細胞體外增殖，且SCVP對小鼠脾淋巴細胞具有有絲分裂原性。
　　3.川明參多糖及其硫酸化物對環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠免疫水平的影響本研究采用CY來誘導(dǎo)小鼠免疫低下;免疫器官變化情況通過測定胸脾指數(shù)來衡量;CVP及SCVP不同劑量對靜息期細胞、ConA處理細胞、LPS處理細胞增殖活性的變化情況運用MTT法進行檢測;血

5、清IFN-γ，和IL-2采用ELISA試劑盒檢測。結(jié)果顯示:與模型組相比CVP和SCVP各試驗劑量組均能顯著(P＜0.05)提高免疫低下小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù); CVP和SCVP各試驗劑量3種處理方式脾臟淋巴細胞光密度(OD)值均顯著(P＜0.05)高于模型組;與模型組相比CVP和SCVP各試驗劑量組均能顯著提高免疫低下小鼠血清細胞因子IFN-γ和IL-2的水平。結(jié)果表明，CVP和SCVP可以通過提高免疫低下小鼠免疫器官指數(shù)、各處理脾

6、臟淋巴細胞增殖和血清IFN-γ和IL-2含量，從而提高機體的免疫力。4.川明參多糖對雞新城疫疫苗免疫應(yīng)答的影響本研究對7日齡雞分組、注射新城疫疫苗、連續(xù)7天按要求口服CVP，于14日齡、21日齡、28日齡采集相關(guān)樣品，通過對血清抗體水平、紅細胞免疫功能、T淋巴細胞增殖活性和T淋巴細胞亞群的測定，進而評價CVP對疫苗免疫應(yīng)答的影響。結(jié)果顯示:在第14日齡和28日齡時，CVP給藥各組抗體效價均顯著高于(P＜0.05)對照組;在第14日齡和2

7、1日齡時，CVP給藥各組外周血淋巴細胞增殖率均顯著高于(P＜0.05)對照組;在第14日齡和28日齡時，CVP給藥組的紅細胞C3b受體花環(huán)率均顯著(P＜0.05)高于對照組;在第21日齡和28日齡時，CVP給藥組的紅細胞免疫復(fù)合物花環(huán)率均顯著(P＜0.05)低于對照組;在第21日齡和28日齡時，CVP中劑量組的T淋巴細胞亞群CD4+/CD8+比率顯著(P＜0.05)高于對照組。結(jié)果表明，CVP能增強疫苗免疫后的體液免疫的水平，且延長了疫