海參廢液中活性多糖的提取及其免疫活性的研究.pdf

1、海參體內(nèi)的活性多糖能夠提高機(jī)體免疫力，具有抗血栓、抗腫瘤、抗凝血、降低血清膽固醇等功效。目前，國(guó)內(nèi)海參產(chǎn)品主要有海參鮮品、傳統(tǒng)海參干品、深加工的海參食品。而傳統(tǒng)海參干品仍占據(jù)著市場(chǎng)。在干海參的生產(chǎn)過(guò)程中，通過(guò)煮制鮮海參，產(chǎn)生了大量廢液。這些廢液含有海參多糖等功效成分，被企業(yè)不經(jīng)處理就排放入海。從海參加工廢液中提取海參多糖，不僅能降低生產(chǎn)成本，為企業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)效益，還將減少由廢液處理不當(dāng)所造成的環(huán)境污染。
　　 本文首先研究了

2、苯酚硫酸法測(cè)定海參多糖的準(zhǔn)確性和影響因素，找出了該方法在測(cè)定應(yīng)用中的缺陷，探索了海參多糖特異性顯色的影響因素，建立了準(zhǔn)確測(cè)定海參多糖含量的天青試劑Ⅰ顯色-分光光度測(cè)定方法。其次，以海參加工廢液為原料，利用超濾、噴霧干燥、SFE、酶解、醇沉的工藝除去雜質(zhì)，確定了提取海參多糖的最佳工藝，并通過(guò)活性炭脫色、醋酸鉀溶液沉淀多糖、凝膠柱層析純化得到精致多糖。最后，對(duì)所提取海參多糖進(jìn)行了急毒性實(shí)驗(yàn)和免疫調(diào)節(jié)作用的研究。
　　 結(jié)果如下:

3、r>　　 1.確定了苯酚硫酸法的最大吸收波長(zhǎng)為488.73nm，并建立了苯酚硫酸法測(cè)定多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，A=4.5013x+0.001，R2=0.9997。但是本方法測(cè)定樣品中海參多糖的含量，數(shù)據(jù)波動(dòng)大。進(jìn)一步試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，苯酚硫酸法不適合海參多糖含量的測(cè)定。在此基礎(chǔ)上，探索了樣品前處理對(duì)本方法測(cè)定海參多糖的影響，結(jié)果是乙醇沉淀多糖這一步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響很大。另外，樣品中存在的葡萄糖、蛋白質(zhì)在測(cè)定時(shí)之前必須除去，它們對(duì)結(jié)果影響值接近1∶1。

4、
　　 2.建立了海參多糖特異性顯色法測(cè)定海參多糖，其最大吸收波長(zhǎng)為547nm，樣品液中海參多糖濃度處于5-40mg/L時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)A=0.0087x+0.2057，R2=0.9914。該方法加樣回收率為95.47％，其變異系數(shù)為1.41％(n=6)，即本方法能用來(lái)測(cè)定海參多糖的含量。同時(shí)，用磺酸基間接測(cè)定海參多糖含量的方法驗(yàn)證了本方法測(cè)定海參多糖含量的準(zhǔn)確性和可靠性。
　　 3.通過(guò)比較長(zhǎng)島海參、薛家島海參、張公島三種

5、原料及其煮汁，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)島海參的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高，同時(shí)在其煮汁的干物質(zhì)中灰分和蛋白質(zhì)含量較高，碳水化合物和脂類(lèi)含量較少。對(duì)企業(yè)提供海參廢液的基本營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)水分含量最高，其次是灰分和蛋白質(zhì)。測(cè)定微量元素中Na含量最多。另外，對(duì)干海參和海參加工廢液中海參多糖含量的測(cè)定，確定了海參加工廢液的應(yīng)用價(jià)值。
　　 4.通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出海參多糖的最佳提取工藝條件為:
　　 (1)超濾脫鹽工藝:選用20KD的聚礬類(lèi)中空纖維膜組件對(duì)海參

6、廢液進(jìn)行超濾處理，最佳條件為超濾壓力0.20MPa，25℃左右作為超濾溫度，料液體積流量控制在0.04-0.05L/min。
　　 (2)干制工藝:干燥方式選擇噴霧干燥，控制其進(jìn)出風(fēng)溫度為200-210/100-105℃，所得干粉含水量為3.3％，得率為5.3％。
　　 (3)脫脂工藝:脫脂方式選擇SFE脫脂，最佳條件為萃取壓力35MPa，萃取溫度50℃，CO2流量30kg/h，萃取時(shí)間3h。
　　 (4)酶解工

7、藝:選擇中性蛋白酶為實(shí)驗(yàn)用酶，其用量為1.5％，酶解溫度55℃，酶解時(shí)間8h。
　　 (5)乙醇沉淀工藝:乙醇溶液濃度為80％，無(wú)水乙醇洗滌次數(shù)3次。
　　 (6)最佳工藝提取海參多糖的得率為13.22％，海參多糖的純度為37.83％。
　　 5.粗多糖經(jīng)活性炭吸附脫色、醋酸鉀溶液去蛋白質(zhì)、凝膠柱層析處理后，獲得精致多糖。其性狀為白色粉末，無(wú)臭、無(wú)味，有吸濕性，易溶于水，尤易溶于熱水，不溶于高濃度的乙醇、丙酮、乙