一種鑒定人型結構分枝桿菌的新型分子靶標的發(fā)現與評價及基于靶標的熒光定量PCR方法的建立.pdf

1、目的：
　　尋找與評價新的鑒定人型結核分枝桿菌(MTB)的分子靶標，基于該分子靶標建立實時熒光定量PCR檢測方法。
　　方法：
　　通過生物信息學軟件比對細菌全基因組，發(fā)現一個特異存在于MTB基因組中的DNA片段(Mycobacterium tuberculosis specificsequence，mtss);針對該DNA片段，設計PCR引物，在266株微生物及人臍靜脈細胞中進行檢測;通過與傳統(tǒng)生化及其它核酸靶標16

2、srDNA、IS6110、mtp40鑒定結果的比較，評價該片段的鑒定效能。基于該片段良好的鑒定效能，建立實時熒光定量PCR的檢測方法。
　　結果：
　　特異性引物(Mtss1，Mtss2)對應的擴增序列mtss90保守性與特異性均良好。其保守存在于所有被檢MTB株中，除與田鼠分枝桿菌有交叉外，特異性良好。與傳統(tǒng)鑒定結果相比，符合率為99.1％(233/235)，兩例不相符的臨床分離株經測序及多指標聯合鑒定，證實mtss90的

3、鑒定結果正確。與核酸靶標16s rDNA（分枝桿菌屬特征性靶標）、IS6110(結核分枝桿菌復合體特征性靶標)符合率可達100％;與mtp40（MTB的特征性靶標）的符合率為99.6％(234/235)，唯一不相符的臨床分離株為mtp40缺失的MTB株。成功建立基于mtss90的實時熒光定量PCR方法。
　　結論：
　　通過生物信息學軟件篩選出的MTB特征性序列可作為鑒定MTB的新型分子靶標，可單獨或與其它指標聯合用于結核病