一種鑒定人型結(jié)構(gòu)分枝桿菌的新型分子靶標(biāo)的發(fā)現(xiàn)與評(píng)價(jià)及基于靶標(biāo)的熒光定量PCR方法的建立.pdf

1、目的：
　　尋找與評(píng)價(jià)新的鑒定人型結(jié)核分枝桿菌(MTB)的分子靶標(biāo)，基于該分子靶標(biāo)建立實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。
　　方法：
　　通過(guò)生物信息學(xué)軟件比對(duì)細(xì)菌全基因組，發(fā)現(xiàn)一個(gè)特異存在于MTB基因組中的DNA片段(Mycobacterium tuberculosis specificsequence，mtss);針對(duì)該DNA片段，設(shè)計(jì)PCR引物，在266株微生物及人臍靜脈細(xì)胞中進(jìn)行檢測(cè);通過(guò)與傳統(tǒng)生化及其它核酸靶標(biāo)16

2、srDNA、IS6110、mtp40鑒定結(jié)果的比較，評(píng)價(jià)該片段的鑒定效能?；谠撈瘟己玫蔫b定效能，建立實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢測(cè)方法。
　　結(jié)果：
　　特異性引物(Mtss1，Mtss2)對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增序列mtss90保守性與特異性均良好。其保守存在于所有被檢MTB株中，除與田鼠分枝桿菌有交叉外，特異性良好。與傳統(tǒng)鑒定結(jié)果相比，符合率為99.1％(233/235)，兩例不相符的臨床分離株經(jīng)測(cè)序及多指標(biāo)聯(lián)合鑒定，證實(shí)mtss90的

3、鑒定結(jié)果正確。與核酸靶標(biāo)16s rDNA（分枝桿菌屬特征性靶標(biāo)）、IS6110(結(jié)核分枝桿菌復(fù)合體特征性靶標(biāo))符合率可達(dá)100％;與mtp40（MTB的特征性靶標(biāo)）的符合率為99.6％(234/235)，唯一不相符的臨床分離株為mtp40缺失的MTB株。成功建立基于mtss90的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。
　　結(jié)論：
　　通過(guò)生物信息學(xué)軟件篩選出的MTB特征性序列可作為鑒定MTB的新型分子靶標(biāo)，可單獨(dú)或與其它指標(biāo)聯(lián)合用于結(jié)核病