抗菌肽PR-39在兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的分泌表達(dá)及抗菌活性檢測(cè).pdf_第1頁(yè)
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1、目的：通過構(gòu)建包含脯氨酸精氨酸抗菌肽（proline-arginine rich39-amino acid peptide，PR-39）的慢病毒載體，轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone mesenchymal stem cells，BMSC），并檢測(cè)其在BMSC中的表達(dá)及抗菌活性。
　　 方法：PCR擴(kuò)增目的基因，連接入慢病毒載體質(zhì)粒pGC-FU中，與包裝質(zhì)粒pHelper1.0、pHelper2.0在脂質(zhì)體2000介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染29

2、3T細(xì)胞包裝出慢病毒顆粒，Real-Time PCR檢測(cè)滴度；分離培養(yǎng)BMSC，并用PR-39慢病毒載體轉(zhuǎn)染BMSC，熒光顯微鏡觀察和流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，RT-PCR法檢測(cè)目的基因的表達(dá)情況，同時(shí)檢測(cè)PR-39抗菌活性。
　　 結(jié)果：成功得到滴度為2×109 TU/ml的PR-39慢病毒顆粒，并成功轉(zhuǎn)染BMSC，轉(zhuǎn)染72h后觀察到細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光，流式細(xì)胞儀檢測(cè)到其轉(zhuǎn)染效率為74.09％，RT-PCR檢測(cè)到BMSC中有PR-

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