仔豬抗菌肽PR-39與Protegrin-1基因表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、為研究抗菌肽基因PR-39及Protegrin-1 mRNA在不同日齡仔豬胸腺、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)及股骨骨髓中的表達(dá)規(guī)律，探討斷奶和日糧中添加復(fù)合多糖對(duì)其表達(dá)的影響，根據(jù)已報(bào)道的豬抗菌肽PR-39、Protegrin-1和內(nèi)標(biāo)18s rRNA基因序列，設(shè)計(jì)抗菌肽和18s rRNA的引物，構(gòu)建一優(yōu)化的半定量RT-PCR方法用于仔豬抗菌肽基因mRNA表達(dá)量的測(cè)定，為今后抗生素替代產(chǎn)品環(huán)保型飼料添加劑的開發(fā)與應(yīng)用提供理論依據(jù)和指導(dǎo)。

2、試驗(yàn)1：選用胎次基本相同，出生體重相近的0、3、14、23(未斷奶)、23(斷奶2d)、28(未斷奶)、28(斷奶7d)日齡健康杜長(zhǎng)大公仔豬各4頭，屠宰后無(wú)菌條件下分別取出胸腺、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)及股骨骨髓，用RT-PCR法檢測(cè)其中PR-39及Protegrin-1基因表達(dá)的差異以及斷奶對(duì)其表達(dá)的影響。研究結(jié)果表明，PR-39及Protegrin-1在骨髓中表達(dá)最豐富(P<0.05)，胸腺其次，脾臟和腸系膜淋巴結(jié)中表達(dá)最少。各免疫組織中

3、PR-39 mRNA的表達(dá)隨日齡變化的規(guī)律一致，0～3日齡PR-39 mRNA的表達(dá)呈上升趨勢(shì)，3～14日齡呈下降趨勢(shì)，14～28日齡表達(dá)又有所回升。骨髓和胸腺中Protegrin-1 mRNA的表達(dá)量隨日齡的增加持續(xù)上升，但各日齡間的表達(dá)差異均不顯著。脾臟和腸系膜淋巴結(jié)中Protegrin-1mRNA的表達(dá)量隨日齡變化的規(guī)律與PR-39一致。另外，各免疫組織中PR-39及Protegrin-1在23日齡(斷奶2d)的表達(dá)較23日齡(未

4、斷奶)時(shí)的表達(dá)有下降趨勢(shì)，在骨髓中分別下降了16.04％(P<0.05)和20.11％(P<0.05)，在胸腺、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)中差異不顯著(P>0.05)；各免疫組織中PR-39及Protegrin-1基因在28日齡(斷奶7d)的表達(dá)較28日齡(未斷奶)時(shí)的表達(dá)相比，也呈下降趨勢(shì)，但差異不顯著。結(jié)果揭示，PR-39及Protegrin-1mRNA的表達(dá)存在組織和日齡差異性，并且斷奶對(duì)其基因的表達(dá)產(chǎn)生顯著影響。 試驗(yàn)2：選用1

5、60頭28日齡杜長(zhǎng)大斷奶仔豬，按體重相近原則隨機(jī)分成5個(gè)處理組，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8頭豬(公母各半)，分別飼喂基礎(chǔ)飼糧(DE13.50MJ/kg，CP18.60％)、添加0.027％抗生素飼糧、添加0.05％復(fù)合多糖(牛膝、玄參、杜仲)飼糧、添加0.1％復(fù)合多糖飼糧，添加0.15％復(fù)合多糖飼糧。預(yù)飼期7天，正飼期為28天。飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組隨機(jī)取4頭屠宰，無(wú)菌條件下取左腿股骨骨髓，檢測(cè)其中PR-39及Protegrin-1 mR

6、NA表達(dá)量。研究結(jié)果表明，復(fù)合多糖對(duì)斷奶仔豬體內(nèi)抗菌肽PR-39及Protegrin-1 mRNA的表達(dá)有顯著影響?；A(chǔ)日糧中添加不同劑量的復(fù)合多糖均不同程度地促進(jìn)TPR-39及Protegrin-1 mRNA的表達(dá)，以0.10％組效果最好，PR-39 mRNA的表達(dá)分別超過(guò)對(duì)照組和抗生素組50％和51.5％(P<0.05)，Protegrin-1 mRNA的表達(dá)分別超過(guò)對(duì)照組和抗生素組36.36％(P<0.05)和27.90％(P>0