斯氏按蚊感染約氏瘧原蟲后24小時差異表達基因的篩選與分析.pdf

1、目的:瘧疾是由蚊媒傳播的,危害較大的傳染病之一。長期以來,瘧疾防治的主要手段是藥物預(yù)防和治療。由于瘧原蟲抗藥性及蚊媒耐藥性的產(chǎn)生及有效疫苗的缺乏,科學(xué)家將目標(biāo)移向蚊媒與瘧原蟲相互關(guān)系的研究中,未來瘧疾防治策略趨向于“遺傳改造媒介按蚊”即轉(zhuǎn)基因蚊子。瘧原蟲感染按蚊后誘導(dǎo)其體內(nèi)大量免疫相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄激活,進而干擾瘧原蟲在蚊體內(nèi)的生長發(fā)育,因此通過篩選這些免疫相關(guān)基因,進而應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因按蚊,為瘧疾的生物防治提供新的靶點。
　　 本實驗

2、通過建立斯氏按蚊感染瘧原蟲的實驗?zāi)Ｐ?構(gòu)建其感染瘧原蟲后24小時的雙向cDNA文庫,篩選蚊體內(nèi)與瘧原蟲發(fā)育相關(guān)的差異表達基因,并與NCBI中其他蚊蟲基因組序列做同源性比對,將其中未找到同源性的序列做生物信息學(xué)的分析,以預(yù)測其功能。
　　 方法:用消減雜交技術(shù)構(gòu)建了斯氏按蚊感染組及對照組的雙向cDNA文庫。分別從兩個文庫中挑取克隆測序,測序結(jié)果去除載體及低質(zhì)量的序列,經(jīng)拼接后,將其進行blast查詢比對,搜索其同源序列,隨后對未找

3、到同源性的序列運用信號肽預(yù)測軟件signalPv3.0、蛋白定位預(yù)測軟件targetp v1.1、非經(jīng)典分泌蛋白預(yù)測軟件SecretomeP、跨膜螺旋結(jié)構(gòu)預(yù)測軟件TMHMMv2.0及ProtFun軟件進行生物信息學(xué)預(yù)測分析。
　　 結(jié)果:(1)從構(gòu)建的正向文庫得到54條序列,反向文庫得67條序列。(2)將所有序列與NCBI/tblastx/ESTs做同源性搜索,結(jié)果顯示兩個文庫中有51條序列可以找到相似度較高的同源性序列,有66

4、條序列未能夠比對到相似序列。(3)將其中未找到相似序列的66條進行了生物信息學(xué)分析,結(jié)果顯示20條序列含有信號肽區(qū)域;只有1條屬于非經(jīng)典分泌蛋白;11條序列屬于分泌通路信號肽(secretory pathway signal peptide,SP),27條序列屬于線粒體靶位肽(mitochondrialtargeting peptide,mTP);10條序列含有跨膜螺旋結(jié)構(gòu)及信號肽區(qū)域。(4)ProtFun結(jié)果顯示多數(shù)篩選出的非同源序列