基于基因芯片研究漢黃芩素抗腫瘤作用機(jī)制.pdf

1、近年來(lái)的研究表明，從黃芩根中分離出的一種植物源黃酮類化合物漢黃芩素，能有效地抑制多種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，是一種非常有前途的、具有多靶點(diǎn)的潛在抗腫瘤藥物。但漢黃芩素抗腫瘤機(jī)制較為復(fù)雜，至今仍未完全闡明。本實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素在一定濃度范圍(12.5～200μmol/L)對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901和肝癌細(xì)胞Huh7生長(zhǎng)沒有顯著的抑制作用，而能顯著地抑制肝癌細(xì)胞HepG2增殖，且呈時(shí)間和劑量依賴性。漢黃芩素作用于HepG2細(xì)胞48 h后的IC

2、50值為115.7μmol/L。應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)漢黃芩素對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡及周期的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)漢黃芩素能阻滯細(xì)胞G1，抑制S期的DNA合成，而促進(jìn)細(xì)胞凋亡;0、50、100、200μmol/L漢黃芩素作用于細(xì)胞48 h后的凋亡率(％)分別為2.58±0.07，4.04±0.15，9.54±0.14，27.33±0.12。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室法結(jié)果表明漢黃芩素(50～200μmol/L)能抑制肝癌細(xì)胞HepG2

3、遷移作用。這些研究結(jié)果證實(shí)了漢黃芩素有明顯的抗腫瘤作用。我們應(yīng)用Affymetrix HG-u133Plus2.0全人類基因表達(dá)譜芯片，檢測(cè)漢黃芩素作用于肝癌細(xì)胞HepG248 h后的基因表達(dá)差異。結(jié)果篩出406個(gè)差異表達(dá)明顯的基因（上調(diào)或下調(diào)倍數(shù)大于2），其中295個(gè)基因上調(diào)，111個(gè)基因下調(diào)。在6次比較中，差異倍數(shù)均明確達(dá)4倍以上的上調(diào)基因12條，如FAM129A，INHBE，GDF15等;差異倍數(shù)均達(dá)4倍以上的下調(diào)基因8條，包括C

4、ox-1，H19等。利用生物注釋數(shù)據(jù)據(jù)庫(kù)Gene Ontology(GO)對(duì)406個(gè)差異基因功能聚類分析共有148個(gè)功能類別。利用KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)這些差異基因進(jìn)行通路分析，共涉及61條生物學(xué)通路。包括細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生、代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期、物質(zhì)運(yùn)輸?shù)榷鄠€(gè)生物過(guò)程。其中顯著變化的通路是細(xì)胞周期和MAPK信號(hào)通路。細(xì)胞周期通路中GADD45α，CDKN1A，CDKN2B基因上調(diào)，MAPK通路的MAP4K4基因上調(diào)，ARPB1，JUN，