HSP70在TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用.pdf

1、Nodal/TGF-β信號(hào)通路是TGF-β超家族的成員，在脊椎動(dòng)物胚胎發(fā)育、組織分化、維持穩(wěn)態(tài)，以及細(xì)胞的凋亡、遷移疾病的發(fā)生等生理病理過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。
　　 作為Nodal/TGF-β信號(hào)通路中的重要元件，Smad2 會(huì)與很多協(xié)同作用蛋白以及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合調(diào)控Nodal/TGF-β信號(hào)通路，從而影響下游靶基因的表達(dá)。這些蛋白和Smad2的相互作用直接影響著TGF-β信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和調(diào)控過(guò)程。
　　 為了鑒定一些新的

2、Smad2 結(jié)合因子，本文利用GST-Smad2 融合蛋白為誘餌，使用GST pull down assay 技術(shù)分離其潛在的結(jié)合蛋白。采用質(zhì)譜技術(shù)分析蛋白組分發(fā)現(xiàn)了MDM2 結(jié)合蛋白MTBP和熱休克蛋白HSP70。蛋白質(zhì)免疫共沉淀的結(jié)果表明，HSP70不僅可以與斑馬魚Smad2 相互作用，還可以與人Smad2 結(jié)合，而且體外翻譯的兩種蛋白也存在相互作用。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)HSP70對(duì)于Smad2 介導(dǎo)的TGF-β信

3、號(hào)通路有著明顯的抑制作用，而HSP70抑制劑和HSP70siRNA 均可以上調(diào)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，證明了HSP70對(duì)Smad2 介導(dǎo)的TGF-β信號(hào)存在負(fù)調(diào)控作用。
　　 進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，HSP70在TGF-β刺激前后均在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，使用持續(xù)激活TGF-βI 型受體激活信號(hào)通路，HSP70與Smad2的結(jié)合沒有受到明顯的影響。但是過(guò)表達(dá)HSP70可以導(dǎo)致HEK293細(xì)胞內(nèi)源Smad2 磷酸化水平明顯降低，更重要的是，本研究還發(fā)現(xiàn)HSP

4、70可以阻滯TGF-β刺激誘導(dǎo)的Smad2 進(jìn)入細(xì)胞核過(guò)程。
　　 結(jié)合檢測(cè)上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了過(guò)表達(dá)HSP70可以阻礙TGF-β誘導(dǎo)的上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，這一結(jié)果也充分說(shuō)明了HSP70對(duì)TGF-β信號(hào)的負(fù)調(diào)控作用，而且還說(shuō)明這種負(fù)調(diào)控會(huì)影響一些和TGF-β信號(hào)有關(guān)的重要生理進(jìn)程。
　　 TGF-β信號(hào)在腫瘤發(fā)生早期具有抑制細(xì)胞增生的作用。而在腫瘤組織中，HSP70比正常組織有高水平表達(dá)。本文發(fā)現(xiàn)