超順磁微球的制備及其在螨蟲過(guò)敏原和轉(zhuǎn)基因檢測(cè)的初步應(yīng)用.pdf

1、超順磁微球是將利用納米技術(shù)制備出來(lái)的一種具備超順磁特性的納米粒子再包覆于高分子材料中的高分子微球。超順磁微球具有超順磁性和表面覆蓋活性基團(tuán)等特點(diǎn)，在生物技術(shù)和生命科學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
　　 本論文制備了具有表面羧基活性的能滿足生物磁分離要求的超順磁微球。并利用綠色熒光蛋白(GFP)初步驗(yàn)證了超順磁微球的性能。應(yīng)用自制超順磁微球在螨蟲過(guò)敏原特異性抗體IgE和轉(zhuǎn)基因片段的檢測(cè)兩方面進(jìn)行了初步的應(yīng)用。主要研究結(jié)果如下：

2、>　　 1.制備了50nm、200nm和1μm三種粒徑的超順磁微球。通過(guò)掃描電鏡和紅外光譜分析等一系列的方法進(jìn)行了功能表征分析。結(jié)果顯示，三種粒徑的超順磁微球的形貌都為規(guī)則的球形，粒徑均一，單分散性良好，表面均為羧基官能團(tuán)修飾，磁響應(yīng)性良好，滿足生物磁分離的技術(shù)要求。
　　 2.將制備好的超順磁微球與GFP抗體交聯(lián)后，捕獲粗提液中的GFP蛋白，利用GFP蛋白的熒光特性進(jìn)行芯片掃描分析。結(jié)果表明：自制的超順磁微球能與GFP抗體偶

3、聯(lián)；偶聯(lián)后的免疫超順磁微球能特異性結(jié)合GFP，且隨著粗提液中GFP濃度的升高，超順磁微球富集GFP蛋白后的熒光檢測(cè)值也逐漸升高；利用該免疫超順磁微球富集的方法，可以特異性分離純化到靶標(biāo)分子GFP蛋白。
　　 3.研究了三種粒徑的超順磁微球與抗人IgE的抗體偶聯(lián)，制成免疫超順磁微球。比較了這三種免疫超順磁微球?qū)ρ逯锌侷gE的檢測(cè)效果，發(fā)現(xiàn)三種檢測(cè)效果均優(yōu)于常規(guī)檢測(cè)，其中又以200nm與1μm免疫超順磁微球的檢測(cè)效果最好，并分析獲

4、得了檢測(cè)血清IgE的最適免疫超順磁微球用量。在上述基礎(chǔ)上，發(fā)明了一種基于超順磁微球與抗人IgE的抗體偶聯(lián)檢測(cè)過(guò)敏原的方法。該方法提高了檢測(cè)的靈敏度，尤其是在sIgE濃度較低時(shí)。分析還表明，在IgE總量一定的情況下，待測(cè)樣品的體積擴(kuò)大至常規(guī)檢測(cè)方法的3倍時(shí)，檢測(cè)靈敏度不受影響；隨著體積的進(jìn)一步擴(kuò)大，檢測(cè)值有所下降，擴(kuò)大為10倍時(shí)，趨近于常規(guī)方法的檢測(cè)值。
　　 4.發(fā)明了一種采用免疫超順磁微球檢測(cè)過(guò)敏原特異性IgE抗體(sIgE)

5、的方法，該方法以超順磁微球?yàn)檩d體，直接偶聯(lián)戶塵螨過(guò)敏原蛋白，進(jìn)而檢測(cè)戶塵螨過(guò)敏原特異性IgE抗體。應(yīng)用該方法在sIgE濃度為0.035 IU/mL～3.5 IU/mL的范圍內(nèi)建立了線性關(guān)系，R2=0.9874，相關(guān)系數(shù)良好。
　　 5.以轉(zhuǎn)基因中常用的玉米Ubi-1啟動(dòng)子序列作為檢測(cè)靶基因。通過(guò)偶聯(lián)氨基修飾的部分或全長(zhǎng)Ubi-1啟動(dòng)子制成磁珠探針，捕獲靶基因片段。利用芯片掃描技術(shù)對(duì)磁珠探針的富集效果檢測(cè)，結(jié)果顯示熒光檢測(cè)值與拷貝