花生、河蝦過(guò)敏原抗體的制備及壓電免疫傳感同步檢測(cè).pdf

1、花生、河蝦屬于八大類容易引起過(guò)敏的食品，相對(duì)其它食品過(guò)敏而言，它們的過(guò)敏發(fā)生率較高、臨床癥狀更為嚴(yán)重，在公共衛(wèi)生和食品安全領(lǐng)域倍受人們的關(guān)注。而現(xiàn)有的過(guò)敏原檢測(cè)方法操作繁瑣，無(wú)法滿足快速、簡(jiǎn)便、在線檢測(cè)的要求，因此，研究和建立一種方便、安全和快速的檢測(cè)方法具有重要意義。
　　 研究主要內(nèi)容包括花生、河蝦過(guò)敏原的分離純化，免抗花生、河蝦多克隆抗體的制備，探索膠體金是否可以作為一種新型的免疫佐劑；運(yùn)用自組裝的壓電免疫傳感器測(cè)定花生抗

2、體和河蝦抗體的免疫親和常數(shù)，并同時(shí)包被兩種抗體，對(duì)過(guò)敏原分別進(jìn)行篩檢。
　　 花生、河蝦蛋白浸液經(jīng)硫酸銨分級(jí)沉淀，等電點(diǎn)沉淀，AKTA蛋白純化系統(tǒng)得到純化，收集后經(jīng)電泳檢驗(yàn)。采用檸檬酸三鈉還原法制備得到16nm左右的膠體金，以新西蘭大白兔為模式動(dòng)物制備抗體，免疫過(guò)程設(shè)立膠體金為佐劑和弗氏完全(不完全)佐劑作對(duì)照，發(fā)現(xiàn)膠體金能夠顯著提高大白兔體內(nèi)抗花生、河蝦過(guò)敏蛋白的抗體水平，花生與膠體金組的平均效價(jià)比弗氏佐劑組提高了一倍，其IC

3、50為34.28 ng/mL；河蝦與膠體金組的平均效價(jià)比弗氏佐劑組提高了25%，其IC50為43.95 ng/mL。
　　 運(yùn)用自組裝的壓電免疫傳感器測(cè)定得到花生抗體的親和常數(shù)Kα=2.86×107L/mol，混合抗體對(duì)花生抗原的Kα=1.37×107 L/mol；河蝦抗體的Kα=5.16×107L/mol，混合抗體對(duì)河蝦抗原的Kα=2.57×107 L/mol。自組裝的壓電傳感器同時(shí)包被花生和河蝦混合抗體，分別加入一系列濃度的