骨髓間充質干細胞和肌腱干細胞構建組織工程化肌腱的對比研究.pdf

1、肌腱組織由于其獨特的解剖和組織結構，因此缺乏自身修復能力，愈合后損傷部位以常以瘢痕組織代替。為解決此問題，組織工程化肌腱成為研究熱點，但目前使用的人工生物材料載體存在老化、排異等缺點。骨髓間充質干細胞(BMSCs)作為老牌種子細胞在組織再生領域應用廣泛，但有報道稱其應用后出現(xiàn)了異位鈣化、干細胞形成腫瘤等情況。肌腱干細胞(TDSCs)由于其來源，用于肌腱修復研究理論上更具優(yōu)勢。結締組織生長因子(CTGF)可誘導兩種細胞向肌腱細胞方向分化。

2、因此，課題組使用CTGF和這兩種細胞進行體外實驗，構建出一種不含其它材料的組織工程化肌腱用于肌腱損傷的修復，并通過對比兩種細胞選取更適合肌腱損傷修復的種子細胞。
　　目的：
　　1、驗證結締組織生長因子(CTGF)誘導骨髓間充質干細胞(BMSCs)和肌腱干細胞(TDSCs)成肌腱分化能力，并對比兩種干細胞誘導前后的成肌腱潛能。
　　2、利用結締組織生長因子(CTGF)誘導成肌腱分化能力，利用這兩種干細胞體外構建組織工程

3、化肌腱。
　　3、初步探索組織工程化肌腱在肌腱損傷修復中的作用，并對比兩種組織工程化肌腱的效果。
　　方法：
　　1、分離培養(yǎng)綠熒光大鼠的骨髓間充質干細胞(BMSCs)和肌腱干細胞(TDSCs)，并進行鑒定。
　　2、取第3代的骨髓間充質干細胞(BMSCs)和肌腱干細胞(TDSCs)，25ng/ml的CTGF進行誘導分化培養(yǎng)2周，選取scleraxis和tenomodulin這兩個成肌腱相關基因，利用RT-qPC

4、R進行mRNA表達檢測。驗證CTGF誘導BMSCs和TDSCs成肌腱分化能力，并對比兩種干細胞誘導前后的成肌腱潛能。
　　3、取第3代的BMSCs和TDSCs，體外誘導成肌腱分化2周，并構建出干細胞組織工程化肌腱。
　　4、將BMSCs和TDSCs構建的組織工程化肌腱分別植入裸鼠皮下，8周、12周后取材，進行組織形態(tài)學檢測、免疫組化染色。
　　結果：
　　1、RT-qPCR結果顯示，CTGF能顯著增加BMSCs和

5、TDSCs中tenomodulin和scleraxis的mRNA表達(p＜0.05)，對比發(fā)現(xiàn)，誘導分化前后TDSCs中tenomodulin和scleraxis的mRNA表達均明顯高于BMSCs(p＜0.05)。
　　2、利用CTGF誘導BMSCs和TDSCs體外構建兩種組織工程化肌腱，組織形態(tài)學分析結果顯示兩種組織工程化肌腱均具有不成熟肌腱樣結構，TDSCs組結構更加理想。
　　3、組織形態(tài)學和免疫組織化學分析結果顯示，

6、兩種組織工程化肌腱均可在裸鼠體內形成肌腱樣組織，其中TDSCs組種植后結構成熟更快，細胞外基質成分更加接近正常肌腱。
　　結論：
　　1、CTGF配合抗壞血酸可有效誘導BMSCs和TDSCs成肌腱分化，TDSCs比BMSCs有著更大的成肌腱分化潛能。
　　2、僅利用二維條件進行細胞培養(yǎng)，利用CTGF誘導BMSCs和TDSCs的成肌腱分化作用，兩種細胞均可在體外構建出一種不含任何合成人工材料的組織工程化肌腱。