Th17細(xì)胞在人早孕期母—胎界面功能性調(diào)節(jié)作用.pdf

1、生理妊娠類似于同種移植,作為同種移植物的胚胎在母體存活直至分娩,實(shí)際上反映母體對(duì)胚胎的免疫耐受;母體對(duì)胚胎的免疫排斥則導(dǎo)致妊娠失敗。揭示母-胎免疫耐受的確切機(jī)制,將對(duì)人類自然流產(chǎn)等妊娠疾患的防治具有重要意義;并對(duì)移植免疫學(xué)和腫瘤免疫學(xué)的研究將產(chǎn)生推動(dòng)作用。
　　母-胎界面主要包括滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜基質(zhì)細(xì)胞、蛻膜腺上皮細(xì)胞以及免疫細(xì)胞。多年來(lái)人們從不同角度研究母-胎界面發(fā)生的生物學(xué)事件,以闡述母-胎免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,其中包括母-胎界面Th2

2、型免疫優(yōu)勢(shì)的形成,及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)擴(kuò)增及功能機(jī)制。Th17細(xì)胞作為新近研究發(fā)現(xiàn)的一群T輔助細(xì)胞亞群,參與多種自身免疫性疾病及移植物抗宿主病的發(fā)生,我們研究發(fā)現(xiàn)人早孕期間蛻膜Th17細(xì)胞數(shù)量顯著增加。我們以此為切入點(diǎn),以闡明母一胎界面Th17細(xì)胞的來(lái)源及其在母-胎免疫調(diào)節(jié)中的作用。
　　第一部分人早孕期母-胎界面及外周Th17細(xì)胞亞群增加
　　目的：了解人妊娠期間外周血及母-胎界面Th17細(xì)胞比例的變化。
　　

3、方法：收集正常早、中、晚孕婦女以及正常非孕育齡期婦女外周血,正常早孕婦女蛻膜組織以及非孕婦女子宮內(nèi)膜組織,采用流式細(xì)胞術(shù)分析外周血及蛻膜免疫細(xì)胞中Th17細(xì)胞的比例。
　　結(jié)果：妊娠期婦女外周血、母-胎界面以及正常非孕婦女外周血、子宮內(nèi)膜中均存在Th17細(xì)胞;而且早孕婦女外周血Th17細(xì)胞數(shù)量顯著增加,隨著妊娠進(jìn)展,其比例逐漸下降,至晚孕期達(dá)非孕期水平。與正常非孕婦女子宮內(nèi)膜組織相比,早孕婦女蛻膜組織Th17細(xì)胞亞群顯著增加,且顯

4、著高于外周血。
　　結(jié)論：Th17細(xì)胞可能參與正常妊娠的維持
　　第二部分人母-胎界面Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞的分化發(fā)育
　　目的：解析母-胎界面局部微環(huán)境對(duì)Th17細(xì)胞分化發(fā)育的影響
　　方法：流式細(xì)胞術(shù)分析母-胎界面T細(xì)胞的表型。滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜基質(zhì)細(xì)胞與蛻膜naive CD4+T細(xì)胞間接接觸共培養(yǎng)或者滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜基質(zhì)細(xì)胞或滋養(yǎng)細(xì)胞與蛻膜基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系培養(yǎng)上清存在下,采用anti-CD3抗體和anti-

5、CD28抗體活化磁珠分選的母-胎界面naive CD4+T細(xì)胞。妊娠相關(guān)激素處理蛻膜naiveCD4+T細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)分析Th17細(xì)胞的比例。
　　結(jié)果：母-胎界面存在naive CD4+T細(xì)胞。滋養(yǎng)細(xì)胞、DSC分別,或兩者共培養(yǎng)均顯著抑制蛻膜naive CD4+T細(xì)胞分化發(fā)育為T(mén)h17細(xì)胞。用母-胎界面主要功能細(xì)胞條件培養(yǎng)液處理蛻膜naive CD4+T細(xì)胞顯示,母-胎界面主要功能細(xì)胞條件培養(yǎng)液可顯著抑制Th17細(xì)胞的分化,促

6、進(jìn)Treg細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)分化。妊娠相關(guān)激素不影響Th17細(xì)胞的分化。
　　結(jié)論：母-胎界面微環(huán)境有利于naive CD4+T細(xì)胞分化發(fā)育為T(mén)reg細(xì)胞,而不利于分化發(fā)育為T(mén)h17細(xì)胞,呈現(xiàn)Treg偏移。
　　第三部分人蛻膜基質(zhì)細(xì)胞募集通過(guò)分泌CCL2和CCL20外周Th17細(xì)胞
　　目的：探討母-胎界面Th17細(xì)胞的來(lái)源
　　方法：磁珠分選外周血CD4+T細(xì)胞,采用滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜基質(zhì)細(xì)胞或兩者共培養(yǎng)上清液對(duì)Th17細(xì)

7、胞進(jìn)行趨化試驗(yàn),流式細(xì)胞術(shù)分析趨化至下室的Th17細(xì)胞的數(shù)量。
　　結(jié)果：DSC條件培養(yǎng)液募集至下室的Th17細(xì)胞數(shù)約為外周的2.7倍;而滋養(yǎng)細(xì)胞上清及滋養(yǎng)細(xì)胞與DSC直接接觸共培養(yǎng)上清募集至下室的Th17細(xì)胞數(shù)分別是外周的1.1倍及1.8倍。而在DSC培養(yǎng)上清液中加入anti-CCL2中和性抗體后,可顯著抑制DSC培養(yǎng)上清對(duì)Th17細(xì)胞的趨化作用。
　　結(jié)論：蛻膜基質(zhì)細(xì)胞通過(guò)分泌CCL2募集外周血Th17細(xì)胞到達(dá)蛻膜局部<

8、br>　　第四部分人母-胎界面Th17細(xì)胞促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖及侵襲
　　目的：探討Th17細(xì)胞對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控作用
　　方法：免疫組織化學(xué)及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)母-胎界面主要功能細(xì)胞IL-17R的表達(dá)。磁珠分選naive CD4+T細(xì)胞,體外誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化,制備Th17細(xì)胞培養(yǎng)上清,處理滋養(yǎng)細(xì)胞,檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖及侵襲能力,流式細(xì)胞術(shù)分析滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡。
　　結(jié)果：滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜基質(zhì)細(xì)胞均表達(dá)IL-17R。r

9、hlL-17可以劑量依賴性的方式促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖及侵襲;Th17細(xì)胞培養(yǎng)上清亦可促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖及侵襲;加入IL-17中和抗體后,可顯著抑制滋養(yǎng)細(xì)胞增殖及侵襲能力。Th17細(xì)胞培養(yǎng)上清處理滋養(yǎng)細(xì)胞后,滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡率下降,從2.23％±0.15％下降至1.88％±0.42％;加入IL-17中和抗體后,導(dǎo)致滋養(yǎng)的凋亡率恢復(fù)升高至2.O％±0.11％。
　　結(jié)論：Th17細(xì)胞通過(guò)分泌細(xì)胞因子IL-17調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)行為,參與早孕