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1、為了研究實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(QPCR)在環(huán)境水體病原細(xì)菌檢測中的應(yīng)用價值,分別設(shè)計并合成志賀氏菌(Shigella sp.)、沙門氏菌(Salmonella typhi)、大腸埃希氏菌(Escherichia coil.)、霍亂弧菌(Vibrio cholerae)四種病原細(xì)菌的特異性引物,建立腸道病原細(xì)菌定量PCR檢測方法。同時,應(yīng)用QPCR檢測方法對西安市五處環(huán)境水體即西安市飲用水源水(黑河)、納污河水(浐河)、城市景觀
2、水(大唐芙蓉園北湖和興慶湖)以及污水廠二級出水(北石橋污水凈化中心)中病原細(xì)菌的細(xì)胞密度進(jìn)行4個月的連續(xù)檢測,并將檢測結(jié)果進(jìn)行比較分析,結(jié)果顯示:
本研究建立的QPCR檢測方法能夠?qū)λ姆N目標(biāo)菌株進(jìn)行特異性檢測,QPCR檢測的靈敏度為4.56CFU/μL。該方法可將DNA提取、PCR定量分析控制在5小時內(nèi)完成,充分展示了該法快速靈敏的特點(diǎn)。
對西安市環(huán)境水體的QPCR檢測結(jié)果表明,五個水體中都沒有檢測到霍亂弧菌
3、,這說明該病原細(xì)菌通常情況下在西安市地表水體中不存在。
幾種主要致病菌中,大腸埃希氏菌從各種水體檢出的頻度最高,且在水體受到一定污染后即持續(xù)檢出(大庸芙蓉園北湖和興慶湖).對于污染嚴(yán)重的水體(浐河、北石橋污水凈化中心),大腸埃希氏苗成為水中腸道感染細(xì)菌群的主體,其強(qiáng)度接近于用通用引物檢測出的總細(xì)菌強(qiáng)度;同時,沙門氏菌和志賀氏菌也持續(xù)被檢出,雖然其強(qiáng)度遠(yuǎn)低干大腸埃希氏菌,但可以認(rèn)為是水污染的標(biāo)志之一。
在五個水
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