定量PCR技術(shù)在環(huán)境水體病原細(xì)菌檢測(cè)中的應(yīng)用研究.pdf

1、為了研究實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(QPCR)在環(huán)境水體病原細(xì)菌檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值，分別設(shè)計(jì)并合成志賀氏菌(Shigella sp.)、沙門氏菌(Salmonella typhi)、大腸埃希氏菌(Escherichia coil.)、霍亂弧菌(Vibrio cholerae)四種病原細(xì)菌的特異性引物，建立腸道病原細(xì)菌定量PCR檢測(cè)方法。同時(shí)，應(yīng)用QPCR檢測(cè)方法對(duì)西安市五處環(huán)境水體即西安市飲用水源水(黑河)、納污河水(浐河)、城市景觀

2、水(大唐芙蓉園北湖和興慶湖)以及污水廠二級(jí)出水(北石橋污水凈化中心)中病原細(xì)菌的細(xì)胞密度進(jìn)行4個(gè)月的連續(xù)檢測(cè)，并將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析，結(jié)果顯示：
　　 本研究建立的QPCR檢測(cè)方法能夠?qū)λ姆N目標(biāo)菌株進(jìn)行特異性檢測(cè)，QPCR檢測(cè)的靈敏度為4.56CFU/μL。該方法可將DNA提取、PCR定量分析控制在5小時(shí)內(nèi)完成，充分展示了該法快速靈敏的特點(diǎn)。
　　 對(duì)西安市環(huán)境水體的QPCR檢測(cè)結(jié)果表明，五個(gè)水體中都沒有檢測(cè)到霍亂弧菌

3、，這說明該病原細(xì)菌通常情況下在西安市地表水體中不存在。
　　 幾種主要致病菌中，大腸埃希氏菌從各種水體檢出的頻度最高，且在水體受到一定污染后即持續(xù)檢出(大庸芙蓉園北湖和興慶湖)．對(duì)于污染嚴(yán)重的水體(浐河、北石橋污水凈化中心)，大腸埃希氏苗成為水中腸道感染細(xì)菌群的主體，其強(qiáng)度接近于用通用引物檢測(cè)出的總細(xì)菌強(qiáng)度；同時(shí)，沙門氏菌和志賀氏菌也持續(xù)被檢出，雖然其強(qiáng)度遠(yuǎn)低干大腸埃希氏菌，但可以認(rèn)為是水污染的標(biāo)志之一。
　　 在五個(gè)水