山羊輸卵管上皮細(xì)胞核移植的研究.pdf

1、核移植技術(shù)對(duì)科學(xué)研究具有重要意義,近年來,體細(xì)胞的核移植技術(shù)發(fā)展迅速.該實(shí)驗(yàn)用山羊的輸卵管上皮細(xì)胞進(jìn)行核移植研究,建立了相應(yīng)的核移植技術(shù)程序,如固定針和注射針的作用,卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng),成熟卵母細(xì)胞的去核,輸卵管上皮細(xì)胞輸入卵母細(xì)胞的卵周隙,去核卵母細(xì)胞-輸卵管上皮細(xì)胞復(fù)合體的電融合,重組胚的激活和培養(yǎng)等.該實(shí)驗(yàn)的結(jié)論是:(1)卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)時(shí),在培養(yǎng)液中添加發(fā)情羊血清(EGS)和雌二醇(17-β-E<,2>),可顯著提高卵母

2、細(xì)胞的成熟率.(2)在培養(yǎng)皿中用斜口拔尖的針對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行去核,并將輸卵管上皮細(xì)胞移入卵母細(xì)胞的卵周隙中,會(huì)節(jié)省體外操作的時(shí)間,有益于胚胎的發(fā)育.(3)直流脈沖電壓、脈沖寬度均影響融合率,對(duì)山羊去核卵母細(xì)胞-輸卵管上皮細(xì)胞復(fù)合體來說,當(dāng)兩針電極相隔約3倍卵徑距離時(shí),脈沖電壓為50V,脈沖寬度為50us,2次脈中,脈沖間隔為0.5s是一合適的電融合參數(shù).(4)重組胚用離子酶素和6-二甲氨基嘌呤先后進(jìn)行激活處理,會(huì)顯著提高重組胚的卵裂率.(