抑制HIF-1α降解對糖尿病大鼠缺氧及血管生成因子的影響.pdf

1、目的：構(gòu)建糖尿病大鼠模型，給予HIF-1α降解抑制劑（L-mimosine）處理，觀察腎臟缺氧及血管生成因子相關(guān)因子基因和蛋白表達(dá)變化，評估 L-mimosine對糖尿病腎臟的保護(hù)性作用。
　　方法：使用鏈脲菌素（STZ）腹腔注射誘導(dǎo)構(gòu)建SD大鼠糖尿病模型。設(shè)正常對照組（N組）、糖尿病組（D組）、L-mimosine治療組（L組）。L組于糖尿病鼠成模8周后隔日腹腔注射L-mim（50mg/kg），于12周、16周后采血觀察血糖、尿

2、量以及24小時尿蛋白變化，同時處死大鼠，取腎臟組織，采用缺氧探針檢測缺氧情況，免疫組化/熒光、western bloting和 RT-PCR檢測缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）、血紅素加氧酶-1（HO-1）、脯氨酸羥化酶2（PHD2）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、促血管生成素-1（Ang-1）、促血管生成素-2（Ang-2）的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.兩個糖尿病模型組血糖、尿蛋白水平均明顯高于N組（P＜0.05），但L組尿蛋白

3、明顯低于D組（P＜0.01）。
　　2.腎臟病理顯示兩個糖尿病模型組腎重指數(shù)明顯增加，可見不同程度腎小球增大、部分球囊擴(kuò)張、系膜基質(zhì)增多、腎小管擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞顆粒和空泡變性等，但L組病理改變則有相對有減輕。
　　3.腎組織缺氧探針免疫組化顯示各個組均可見陽性染色，N組主要分布在髓質(zhì)及皮髓交界，模型組擴(kuò)大皮質(zhì)區(qū)；兩個糖尿病模型組的陽性著染面積明顯高于N組（P＜0.01），其中L組陽性著染面積較D組明顯減輕（P＜0.01）

4、。
　　4.免疫組化熒光及蛋白印跡顯示：①HIF-1α主要表達(dá)于腎小管、腎小球細(xì)胞核及部分腎小管胞漿；兩個糖尿病模型組腎組織 HIF-1α均顯著上調(diào)（P＜0.01），其中L組腎組織HIF-1α上調(diào)明顯高于D組（P＜0.01），但16周較12周時下調(diào)（P＜0.01）。②HO-1主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿；兩個糖尿病模型組腎組織HO-1均顯著上調(diào)（P＜0.05)，其中L組上調(diào)明顯高于D組（P＜0.01），但16周較12周下調(diào)（P＜0

5、.01）。③PHD2主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞；兩個糖尿病組PHD2蛋白表達(dá)均上調(diào)（P＜0.01），其中L組上調(diào)高于D組（P＜0.01）。④VEGF突出表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞及部分腎小球；兩個糖尿病模型組VEGF表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.01），其中L組較D組有所上調(diào)。⑤Ang-1突出表達(dá)于腎小球、腎小管及腎臟小血管；兩個糖尿病模型組Ang-1表達(dá)均明顯上調(diào)（P＜0.05）， L組Ang-1蛋白表達(dá)明顯高于D組（P＜0.05）。⑥Ang-2主要

6、表達(dá)于腎小管、部分腎小球胞漿及胞核，以及腎臟小血管；兩個糖尿病模型組腎組織Ang-2表達(dá)明顯上調(diào)（P＜0.05），但兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5. RT-PCR結(jié)果顯示：①兩個糖尿病模型組腎組織HIF-1αmRNA表達(dá)均較N組上調(diào)，但僅L組存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且16周較12周下調(diào)（P＜0.05）。②兩個糖尿病模型組腎組織HO-1mRNA表達(dá)均上調(diào)，但僅16周L組有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。③兩個糖

7、尿病模型組腎組織 PHD2mRNA表達(dá)均上調(diào)（P＜0.05），其中L組的表達(dá)高于D組，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。④兩個糖尿病模型組腎組織VEGF mRNA表達(dá)均上調(diào)，且L組高于D組，但均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。⑤兩個糖尿病模型組腎組織Ang-1mRNA表達(dá)均上調(diào)，但僅L組升高存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），且 L組明顯高于D組（P＜0.05）。⑥兩個糖尿病模型組腎組織Ang-2mRNA表達(dá)均上調(diào)，且L組高于D組，但均無統(tǒng)

8、計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6.指標(biāo)相關(guān)性分析：①缺氧探針面積與尿蛋白呈正相關(guān)（r=0.808， P＜0.05）， HIF-1α、HO-1與缺氧探針（面積）（r=-0.726， r=-0.826，P＜0.05）、蛋白尿（r=-0.882，P＜0.01；r=-0.793，P＜0.05）與呈負(fù)相關(guān)。②缺氧探針面積與Ang-1、Ang-2、VEGF（r=-0.757， r=-0.818，r=-0.791，P＜0.05）呈負(fù)相關(guān)。HI

9、F-1α、HO-1與Ang-1（r=0.960，P＜0.01；r=0.793，P＜0.05）、Ang-2（r=0.739，P＜0.05；r=0.941，P＜0.01）、VEGF（r=0.962，P＜0.05；r=0.872，P＜0.01）呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1. L-mimosine可改善1型糖尿病鼠腎缺氧狀態(tài)；
　　2. L-mimosine改善1型糖尿病鼠腎缺氧作用可能與上調(diào)HIF-1α、HO-1因子表達(dá)相