糖尿病和羅格列酮對大鼠血管鈣化的影響.pdf

1、目的：血管鈣化與心血管疾病的發(fā)病率和死亡率升高有顯著關(guān)系，鈣鹽在血管內(nèi)大量沉積，會導致血管僵硬度增高和順應性下降，脈搏壓和脈搏波速度增加，最終引起左室肥厚和冠脈灌注減少。與非糖尿病患者相比，2型糖尿病患者易于發(fā)生血管鈣化。本實驗即通過建立糖尿病合并血管鈣化的大鼠模型，觀察糖尿病和羅格列酮對大鼠血管鈣化的影響，以及Msx2和Wnt3a在鈣化血管中的表達變化。
　　 方法：取78只6周齡的雄性Wistar大鼠，隨機分為四組：空白對照

2、組(CON,n=22)，單純血管鈣化組(VDN，n=12)，單純糖尿病組(DM，n=12)和糖尿病合并血管鈣化組(DM+VDN，n=32)。于實驗第9周末，給予VDN組大鼠維生素D3和尼古丁處理。DM組和DM+VDN組大鼠經(jīng)過8周的高脂喂養(yǎng)后予小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射制備糖尿病模型。一周后給予DM+VDN組大鼠維生素D3和尼古丁處理。在給予維生素D3和尼古丁處理4周后，從DM+VDN組大鼠中隨機取10只大鼠，給予羅格列酮2mg/(kg·

3、d)-1灌胃(RSG，n=10)，同時另取1O只DM+VDN組大鼠，給予安慰劑處理作為對照(DM+VDN2，n=10)，并從CON組取10只大鼠作為空白對照(CON2，n=10)。于實驗第13周末，處死CON組和DM+VDN組剩余的12只大鼠，以及VDN組和DM組12只大鼠，留取血標本，檢測大鼠血糖、血胰島素、血總膽固醇和甘油三酯水平，取大鼠胸腹主動脈，以血管von Kossa染色、血管鈣含量和堿性磷酸酶活性作為判斷血管鈣化程度的指標，

4、運用real-time PCR方法檢測Msx2和Wnt3a基因及蛋白免疫印跡方法檢測Msx2蛋白在血管中的表達變化。于實驗第21周末處死CON2組，DM+VDN2組和RSG組大鼠，留取相關(guān)標本，觀察上述指標。
　　 結(jié)果：與空白對照組相比，單純血管鈣化組大鼠血管中膜可見散在、微小的、低密度的鈣鹽沉積，但大鼠血管鈣含量和堿性磷酸酶活性無明顯變化，而血管中Msx2和Wnt3amRNA以及Msx2蛋白相對表達量則有所升高(P＜0.05

5、 vs CON)。與空白對照組及單純血管鈣化組相比，糖尿病合并鈣化組大鼠的血管中，可見沿中膜彈力層內(nèi)廣泛分布的鈣鹽沉積，大鼠血管中鈣含量和堿性磷酸酶活性，以及血管內(nèi)Msx2和Wnt3a基因及Msx2蛋白相對表達量增高明顯(P＜0.05 vs CON；P＜0.05 vs VDN)。與糖尿病合并血管鈣化組大鼠相比較，給予羅格列酮干預8周后，von Kossa染色顯示鈣鹽在血管內(nèi)的沉積減少，鈣含量和堿性磷酸酶活性下降明顯(P＜O.05 vs