富貴竹黑腐病拮抗菌H5的篩選、鑒定及其發(fā)酵產(chǎn)物研究.pdf

1、從紅樹林中篩選出一株對富貴竹黑腐病(AspergiIlusnigerV.Tiegh.)有拮抗作用的菌株H5,對該菌株進行了初步鑒定及發(fā)酵條件研究，初步探討了菌株的抑菌機制及發(fā)酵液的穩(wěn)定性，并從其發(fā)酵液中得到了一種對黑曲霉具拮抗作用的蛋白。 對湛江特呈島紅樹林植物紅海欖(Rhizophorastylosa)、木欖(B.gymnorrhiza)、白骨壤(Auicenniamarina)等幾種紅樹植物的根、莖、葉樣品進行拮抗細菌的分離

2、和篩選，以黑曲霉(AspergillusnigerV.Tiegh.)為靶標微生物，通過對峙培養(yǎng)法從中篩選出有拮抗作用的細菌17株，其中從紅海欖(Rhizophorastylosa)根部得到的菌株H5表現(xiàn)較強的平板抑菌能力：對峙平板試驗中，抑菌帶寬度達10.1mm，管碟法測定試驗中抑菌圈平均直徑達24mm，生長速率法顯示發(fā)酵液原液對黑曲霉菌絲生長抑制率達到91.9％。 根據(jù)Biolog自動鑒定系統(tǒng)，H5與系統(tǒng)給定的菌株地衣芽孢桿菌

3、(Bacilluslicheniformis)的相似性系數(shù)為0.830，距離2.41。通過16SrDNA序列分析對菌株進行鑒定，所測定的序列結果通過多序對比顯示菌株H5與枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌的相似性均為99％，與Biolog鑒定相結合初步鑒定菌株為地衣芽孢桿菌。 以發(fā)酵液的菌量及抑菌活性為指標，研究了碳源、氮源和無機鹽對菌株H5生長和抑菌活性的影響并對該菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進行優(yōu)化，通過單因子試驗和正

4、交試驗獲得菌株產(chǎn)抑菌物質的最佳發(fā)酵配方及條件為：即牛肉膏8g，蛋白胨4g，乳糖12g，氯化鈉3g.起始pH值6.0-7.0，溫度28-32℃，裝液量20-50ml/250ml，培養(yǎng)時間72～84h，抑菌圈直徑最高可達26mm。 抑菌機理的研究結果表明拮抗菌H5對黑曲霉病菌菌絲生長和孢子萌發(fā)具有明顯的抑制作用，處理后菌絲分枝異常，菌絲原生質濃縮，頂端胞內物質滲漏，菌絲的生長受到抑制，其無菌濾液可以顯著降低孢子萌發(fā)率，抑制芽管伸長。

5、該菌株不產(chǎn)生幾丁質酶，通過分泌抑菌物質起抑菌作用。H5菌株的無菌濾液對熱、對酸堿均具有較好的穩(wěn)定性。 無菌濾液經(jīng)飽和度60％硫酸銨沉淀后，粗提物具較強的抑菌活性?？咕镔|經(jīng)121℃處理20min仍能保持約80％抑菌活性，經(jīng)胰、胃蛋白酶處理后，抑菌活性無明顯變化，抗菌活性物質可能主要是一類對熱穩(wěn)定的蛋白質類物質，經(jīng)SephadexG-100柱層析收集各管并測定各組分抑菌活性，有抑菌活性的組份經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示單一條帶，從發(fā)