不同培養(yǎng)條件對白念珠菌芽管形成的影響.pdf

1、目的：1.在不同溫度、pH值、培養(yǎng)基等條件影響下誘導白念珠菌芽管生成，并對出芽率進行測定，分析各種培養(yǎng)條件對芽管生成的影響，并試圖找到一種較好的方法來誘導芽管的形成，獲得較純的芽管，為研究白念珠菌表型轉換分子機制提供基礎。2.通過對不同部位來源的白念珠菌菌株在相同培養(yǎng)條件下芽管形成率的比較，來探討菌株毒力的強弱是否與來源部位有關。3.通過對白念珠菌氟康唑耐藥株、劑量依賴性敏感株及敏感株芽管形成率的比較，來探討芽管形成能力不同的菌株是否對

2、氟康唑的敏感性不同。4.通過研究氧化酶抑制劑和活性劑對白念珠菌二相性的影響，來探討其形態(tài)學轉變機制。從而為白念珠菌致病機制的研究，抗真菌藥物的早期研究，臨床鑒定奠定基礎。5.觀察地塞米松對白念珠菌生長及芽管形成的影響。 方法：1.在不同溫度，pH值、培養(yǎng)基，起始菌體濃度下對臨床分離白念珠菌進行誘導培養(yǎng)，采用結晶紫染色法對測定出芽率。2.對臨床上分離鑒定的白念菌珠菌，以標準株作參照，在相同條件下培養(yǎng)，采用結晶紫染色法測定出芽率，然

3、后參照美國國家實驗室標準委員會(NCCLS M-27)方案，采用微量液基法篩選出氟康唑敏感株，耐藥株，劑量依賴株，最后比較觀察不同類型菌株間出芽率的差異。3.將一定量的氧化酶活性劑、氧化酶抑制劑溶解于RPMI1640液體培養(yǎng)基中，新鮮白念珠菌菌液(1×105cells/ml)接種于培養(yǎng)基，以未添加氧化酶調節(jié)劑的培養(yǎng)基作為對照組分別在pH值4、7下37℃分別培養(yǎng)，觀察菌絲相形成的情況，比較出芽率。4.在含有不同濃度地塞米松的培養(yǎng)基中接種白

4、念珠菌，同一條件下培養(yǎng)，觀察地塞米松對白念珠菌生長及芽管形成的影響。 結果：1.相同培養(yǎng)條件下，小牛血清(FCS)比RPMI1640、DMEM培養(yǎng)基誘導出芽率高(P>0.05)，而后倆者之間無顯著性差異(P>0.05)；白念珠菌起始菌體濃度為5×106cfu/ml時，于FCS中振蕩孵育2h，出芽率及芽管純度最好；當菌體濃度超過5×106cfu/ml時，隨著菌體濃度的增加，出芽率反而下降；隨著孵育時間的延長，芽管形成率增高；37℃

5、是最佳孵育溫度，其它溫度都會使出芽率顯著降低。2.不同來源部位的白念珠菌菌株出芽率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001。深部感染來源菌株出芽率明顯高于皮膚粘膜感染來源菌株和正常帶菌者，正常帶菌者與深淺部菌株比較，出芽率無明顯差異(P>0.05)。3.在同一培養(yǎng)時間段，氟康唑劑量依賴性敏感株和耐藥株芽管形成率均高于敏感株，差異具有統(tǒng)計學意義。4.白念珠菌在培養(yǎng)基pH4的RPMI1640中培養(yǎng)時，以酵母相形式生長，加入一磷酸鳥苷(GMP)后，誘

6、導菌絲生長。白念珠菌在培養(yǎng)基pH7的RPMI1640中培養(yǎng)時，以菌絲相形式生長，加入水楊基氧肟酸(SHAM)后，增強了酵母相的增值。5.地塞米松的濃度為0.05 mg/ml、0.1 mg/ml、0.2 mg/ml時，與對照組比較，白念珠菌芽管形成無明顯差別，當?shù)厝姿傻臐舛葹?.4 mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml時與對照組比較，白念珠菌芽管形成率明顯增高。 結論：1.優(yōu)化培養(yǎng)條件可以獲得較純的芽管，結晶紫染色法可

7、精確定量檢測芽管形成率。2.不同部位來源的菌株其毒力及致病性可能不同。3.白念珠菌菌株芽管形成率的高低與其對氟康唑的藥物敏感性相關，且氟康唑劑量依賴性敏感株和耐藥株芽管形成率均高于敏感株。4.氧化酶活性劑和抑制劑影響白念珠菌芽管的形成 5.低濃度的地塞米松(0.05 mg/ml、0.1mg/ml)對白念珠菌的生長及芽管的形成無明顯的影響，中等濃度(0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.8mg/ml，1.0mg/ml)促進白念珠菌芽