中藥蛇六谷石油醚萃取物對小鼠H22肝癌移植瘤生長的抑制作用及其機理的實驗研究.pdf

1、目的:研究中藥蛇六谷石油醚萃取物對小鼠H22肝癌移植瘤生長的抑制作用，并初步探討其可能的作用機理。
　　方法:
　　①采用系統(tǒng)溶劑法，以95％乙醇回流提取蛇六谷后，用石油醚萃取，將萃取物配置成相應(yīng)的藥物濃度；
　　②以皮下接種H22肝癌細(xì)胞的荷瘤小鼠為模型，進(jìn)行蛇六谷石油醚萃取物的體內(nèi)抑瘤實驗，觀察抑瘤率、與5-Fu的協(xié)同抑瘤作用、肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)；
　?、哿魇郊?xì)胞術(shù)檢測蛇六谷石油醚萃取物對小鼠H22

2、肝癌細(xì)胞凋亡率的影響；
　?、苊庖呓M織化學(xué)方法檢測蛇六谷石油醚萃取物對荷瘤小鼠 H22肝癌細(xì)胞生存素（Survivin蛋白）、Bcl-2相關(guān)蛋白X(Bcl-2 associated proteinx，Bax蛋白)表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　?、俚谝淮螌嶒炛校吡仁兔演腿∥锔?、中、低劑量組的抑瘤率分別為35.89%、31.73%、31.00%；5-Fu組的抑瘤率為36.17%；蛇六谷石油醚萃取物高劑量聯(lián)合5-Fu組（

3、以下簡稱為藥物合用組）的抑瘤率為45.35%。第二次實驗中，抑瘤率分別為36.70%、32.60%、32.40%，35.40%，46.30%。兩次實驗結(jié)果顯示蛇六谷石油醚萃取物各劑量組、5-Fu組及藥物合用組對小鼠H22肝癌移植瘤的生長均具有抑制作用，藥物合用組的抑瘤作用最大；石油醚萃取物高、中、低劑量組的抑瘤作用隨著藥物濃度的提高逐漸增強，呈現(xiàn)一定劑量－效應(yīng)關(guān)系；石油醚萃取物高劑量組的抑瘤率與5-Fu組相當(dāng)。數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，蛇六谷石

4、油醚萃取物各劑量組及藥物合用組，與空白對照組比較，瘤重差異有顯著性(P<0.05)；與5-Fu組比較，瘤重差異無顯著性（P>0.05）。5-Fu組與空白對照組比較，瘤重差異有顯著性(P<0.05)。石油醚萃取物高、中、低劑量組間比較，瘤重差異無顯著性(P>0.05)。
　?、诘谝淮螌嶒炛校吡仁兔演腿∥锔邉┝拷M的抑瘤率為35.89%，5-Fu組的抑瘤率為36.17%，蛇六谷石油醚萃取物高劑量聯(lián)合5-Fu組的抑瘤率為45.35%

5、，q值為0.768；第二次實驗中，抑瘤率則分別為36.70%、35.40%、46.30%，q值為0.783。兩次實驗結(jié)果顯示藥物合用組對小鼠H22肝癌移植瘤生長的抑制作用均比各單藥組高,且與空白對照組比較差異有非常顯著性(P<0.01)，但三組間兩兩比較，瘤重差異無顯著性（P>0.05）；同時根據(jù)Burgi修正公式，提示兩者無協(xié)同抑瘤作用。
　?、鄣谝淮螌嶒灲Y(jié)果顯示，蛇六谷石油醚萃取物高、中、低劑量組荷瘤小鼠的平均肝臟指數(shù)分別為5

6、.20±1.14、5.71±1.10、5.76±1.03，5-Fu組為5.50±0.77，藥物合用組為5.42±0.75，空白對照組為6.24±1.00；平均脾臟指數(shù)分別為0.97±0.29、1.11±0.23、1.10±0.32，0.84±0.19，1.21±0.28，1.10±0.21；平均胸腺指數(shù)分別為0.49±0.13、0.53±0.15、0.48±0.15，0.54±0.12，0.47±0.07，0.54±0.19。第二次實驗

7、結(jié)果顯示，蛇六谷石油醚萃取物高、中、低劑量組荷瘤小鼠的平均肝臟指數(shù)分別為5.79±1.57、5.90±1.83、5.92±1.09，5-Fu組為6.11±1.84，藥物合用組為5.89±0.72，空白對照組為6.46±0.93；平均脾臟指數(shù)分別為1.19±0.34、1.20±0.35、1.15±0.23，1.40±0.18，1.38±0.22，1.12±0.31；平均胸腺指數(shù)分別為0.48±0.21、0.37±0.15、0.50±0.1

8、3，0.46±0.20，0.41±0.08，0.50±0.11。兩次實驗結(jié)果顯示，蛇六谷石油醚萃取物各劑量組及藥物合用組的肝臟指數(shù)均比空白對照組低，蛇六谷石油醚萃取物低劑量組與中劑量組的脾臟指數(shù)比空白對照組高，胸腺指數(shù)均比空白對照組低，但數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，蛇六谷石油醚萃取物各劑量組、5-Fu組、藥物合用組及空白對照組之間兩兩比較，肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的差異均無顯著性（P>0.05）。
　　④經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測，第一次實驗蛇六

9、谷石油醚萃取物高、中、低劑量組、5-Fu組、藥物合用組都能促進(jìn)小鼠H22肝癌移植瘤細(xì)胞凋亡，凋亡率分別為66.11±8.32%、63.96±5.59%、60.84±4.80%，65.53±3.17%，71.44±2.99%。其中藥物合用組腫瘤細(xì)胞凋亡率最高；蛇六谷石油醚萃取物高、中、低劑量組對小鼠H22肝癌移植瘤細(xì)胞的凋亡率均比空白對照組高，且呈現(xiàn)一定劑量－效應(yīng)關(guān)系；蛇六谷石油醚萃取物高劑量組的細(xì)胞凋亡率與5-Fu組相當(dāng)，中、低劑量組比

10、5-Fu組低。數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，蛇六谷石油醚萃取物高、中劑量組、5-Fu組、藥物合用組與空白對照組比較，差異有非常顯著性（P<0.01）；蛇六谷石油醚萃取物低劑量組與空白對照組比較差異無顯著性（P>0.05）；藥物合用組與蛇六谷石油醚萃取物中劑量組比較，差異有顯著性（P<0.05），與蛇六谷石油醚萃取物低劑量組比較，差異有非常顯著性（P<0.01）；蛇六谷石油醚萃取物各劑量組及藥物合用組與5-Fu組比較，差異均無顯著性（P>0.05）；

11、蛇六谷石油醚萃取物各劑量組間比較，差異均無顯著性（P>0.05）。
　?、莸谝淮螌嶒灲Y(jié)果顯示，蛇六谷石油醚萃取物組（即蛇六谷石油醚萃取物高、中、低劑量組）小鼠H22肝癌移植瘤29例中Survivin蛋白陽性表達(dá)為11例，陽性率為37.9％；5-Fu組9例中陽性表達(dá)3例，陽性率為33.3％；藥物合用組中陽性表達(dá)為1例，陽性率為10%；空白對照組10例中陽性表達(dá)9例，陽性率為90％。蛇六谷石油醚萃取物組、藥物合用組，均能夠下調(diào)Surv

12、ivin蛋白表達(dá)，且與空白對照組比較，Survivin蛋白表達(dá)差異有非常顯著性(P<0.01)；5-Fu組亦能下調(diào)Survivin蛋白表達(dá)，與空白對照組比較，差異有顯著性(P<0.05)；藥物合用組下調(diào)Survivin蛋白的表達(dá)比5-Fu組及蛇六谷石油醚萃取物組明顯，但三組間兩兩比較，差異無顯著性（P>0.05）。
　?、薜谝淮螌嶒灲Y(jié)果顯示，蛇六谷石油醚萃取物組小鼠 H22肝癌移植瘤29例中Bax蛋白陽性表達(dá)24例，陽性率為82.

13、8％；5-Fu組9例中陽性表達(dá)7例，陽性率為77.8％；藥物合用組10例中陽性表達(dá)8例，陽性率為80％；空白對照組10例中陽性表達(dá)2例，陽性率為20％。蛇六谷石油醚萃取物組、藥物合用組、5-Fu組都能上調(diào)Bax蛋白表達(dá)，其中藥物合用組上調(diào)Bax蛋白表達(dá)的作用高于5-Fu組，但低于蛇六谷石油醚萃取物組。數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，蛇六谷石油醚萃取物組與空白對照組比較，Bax蛋白表達(dá)差異有非常顯著性（P<0.01）；5-Fu組、藥物合用組與空白對照組

14、比較，差異均有顯著性（P<0.05）；蛇六谷石油醚萃取物組、藥物合用組、5-Fu組，三組之間兩兩比較，差異沒有顯著性（P>0.05）。
　　結(jié)論:
　?、偕吡仁兔演腿∥飳π∈驢22肝癌移植瘤的生長具有一定的抑制作用，抑瘤率在31％～36.7％，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，且與空白對照組比較，差異有顯著性(P<0.05)。
　　②蛇六谷石油醚萃取物高劑量聯(lián)合5-Fu組對小鼠H22肝癌移植瘤的抑瘤率為45.35%和46.30

15、%，均比各單藥組有提高，且與空白對照組比較差異有非常顯著性(P<0.01)，但三組間兩兩比較，瘤重差異沒有顯著性（P>0.05），同時根據(jù)Burgi修正公式，提示兩者無協(xié)同抑瘤作用。
　?、凵吡仁兔演腿∥飳蒆22肝癌小鼠的肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)無明顯影響。
　　④蛇六谷石油醚萃取物組，具有促進(jìn)H22肝癌移植瘤腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，凋亡率為60.84%～66.11%。藥物合用組細(xì)胞凋亡率為71.44％。
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