版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:
?。ㄒ唬┩ㄟ^體外及體內(nèi)研究驗證基于單壁碳納米管(SWNTs)的siRNA載體沉默Caspase3對急性梗死(AMI)早期細胞凋亡及心功能的影響;
(二)評估納米金顆粒(AuNP)/膠原(Col)復(fù)合材料對新生大鼠心肌細胞(NRVM)閏盤(ID)組裝及功能成熟的影響,并探討AuNPs調(diào)控ID組裝的分子機制。
方法:
(一)構(gòu)建SWNTs與siRNA復(fù)合載體F-CNT-siCas3,通過west
2、ern blotting、RT-PCR等評估其對體外培養(yǎng)NRVM目的基因表達的影響;通過超聲,Tunel染色等評估其對AMI大鼠早期凋亡、心功能的影響;
?。ǘ┎捎迷恿︼@微鏡(AFM)、透射電鏡(TEM)、掃描電鏡(SEM)、電化學(xué)工作站等表征AuNP/Col復(fù)合材料特性;采用live-dead、阿爾瑪藍染色等評估復(fù)合材料的生物相容性;從形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)及功能上分別評估各組心肌細胞ID相關(guān)蛋白在不同時間點(3d、7d、14
3、d)的表達、分布及組裝情況;采用免疫熒光染色、western blotting、RT-PCR等方法探究β1-整合素信號通路在AuNPs調(diào)控ID成熟及功能發(fā)揮中的作用。
結(jié)果:
(一)western blotting、RT-PCR結(jié)果表明與對照組相比,F(xiàn)-CNT-siCas3降低了NRVM的Caspase3表達;超聲,Tunel染色等結(jié)果表明F-CNT-siCas3可減輕AMI大鼠早期細胞凋亡,改善心功能;
4、(二)SEM檢測結(jié)果表明低濃度AuNP在Col溶液中分散更為均勻;AFM檢測表明材料的粗糙度隨AuNPs濃度的增加而增加;電化學(xué)工作站檢測顯示AuNPs濃度與復(fù)合基質(zhì)的電阻抗呈負相關(guān);Live/Dead染色及阿爾瑪藍染色結(jié)果提示:當(dāng)AuNPs濃度為0.1 mmol/L時材料對細胞活力的影響最小且有較好的促細胞增殖作用;TEM、及western blotting結(jié)果表明:AuNP/Col組NRVM細胞在各時間點的伸展、肌節(jié)發(fā)育情況均明顯優(yōu)
5、于Col組,且AuNPs可顯著增強ID相關(guān)蛋白(Cx43、PKP2、PG和N-cadherin)的表達,尤其加速縫隙連接蛋白Cx43蛋白的極化;鈣瞬變結(jié)果顯示AuNPs/Col組Ca2+的釋放節(jié)律性更顯著,并形成更大幅度的一致性收縮;β1-整合素阻斷實驗表明β1-整合素抗體同時阻斷了縫隙連接蛋白Cx43和力學(xué)連接蛋白N-cadherin的表達。western blotting檢測兩組細胞3、7和14d時的p-FAK、Src和ILK的蛋白
6、表達情況,結(jié)果表明實驗組ILK在各個時間點的表達量均顯著高于對照組。進一步通過Western blotting檢測兩組心肌細胞不同時間點p-AKT等蛋白表達情況,結(jié)果表明實驗組p-AKT在各個時間點的表達量均顯著高于對照組,而其余蛋白無明顯變化;p-AKT信號通路阻斷實驗顯示,與對照組相比,呈線性斑塊分布于心肌細胞間區(qū)域的Cx43蛋白顯著減少。相反,添加β-catenin的信號阻斷劑IWP-2后,未抑制Cx43蛋白的表達及分布。而添加這
7、兩種阻斷劑對心肌細胞間N-cadherin表達無影響。
結(jié)論:
?。ㄒ唬┗赟WNTs的F-CNT-siCas3載體有效沉默了Caspase3表達,并可減少AMI大鼠早期細胞凋亡,改善心功能,為CNTs用于心肌基因治療提供了新的思路;
(二)AuNP/Col復(fù)合基質(zhì)具有良好的生物相容性,且基于AuNPs的膠原復(fù)合基質(zhì)可促進NRVM中ID的形成、組裝和功能成熟。β1-整合素/ILK/p-AKT信號通路在AuNP
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- Calpains介導(dǎo)心肌細胞閏盤重塑.pdf
- 碳納米角-膠原復(fù)合基質(zhì)材料對新生大鼠心肌細胞閏盤相關(guān)蛋白表達及功能成熟的影響.pdf
- 去甲腎上腺素誘導(dǎo)心肌細胞SP、CGRP的表達、心肌細胞凋亡及SP對心肌細胞凋亡影響的研究.pdf
- siRNA干擾MagT1對原代大鼠心肌細胞影響的初步研究.pdf
- Apelin對心肌細胞肥大的影響.pdf
- 早期缺氧對大鼠心肌細胞AMPK的影響及PHIs激活大鼠心肌細胞中AMPK的信號途徑研究.pdf
- 醛固酮對新生大鼠心肌細胞凋亡的影響.pdf
- 辛伐他汀對心衰心肌細胞肌漿網(wǎng)鈣泵的影響
- CyclinA2對心肌細胞缺氧的影響.pdf
- 心肌樣細胞-類似心肌細胞,又不是真正心肌細胞,具有心肌細胞4大特性
- 生長激素對心肌細胞代謝影響的研究.pdf
- 細胞免疫對心肌細胞骨架蛋白的影響.pdf
- 腎上腺髓質(zhì)素對大鼠心肌細胞凋亡影響及機制的研究.pdf
- 反復(fù)力竭運動對大鼠心肌細胞凋亡的影響研究.pdf
- 高糖對大鼠心肌細胞PPARδ表達影響的研究.pdf
- 熱量限制對心肌細胞SIRTs表達的影響.pdf
- 辣椒素對心肌細胞電生理的影響.pdf
- 腺苷及異丙腎上腺素對心肌細胞凋亡的影響.pdf
- 心肌微血管內(nèi)皮細胞損傷對心肌細胞的影響及通絡(luò)干預(yù)研究.pdf
- Ghrelin對高糖誘導(dǎo)心肌細胞凋亡的影響.pdf
評論
0/150
提交評論