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1、桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達系統(tǒng)是80年代發(fā)展起來的新型真核基因表達系統(tǒng),已有幾百種基因在該系統(tǒng)中得到了表達.人生長激素(human growth hormone,HGH)是調(diào)節(jié)人體生長發(fā)育和新陳代謝的重要多肽類激素,該研究利用該系統(tǒng)成功表達了HGH,表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE,Western-blot分析,分子量及免疫活性均與天然產(chǎn)物相同.主要研究內(nèi)容以及研究結(jié)果如下:第一.利用傳統(tǒng)的桿狀病毒載體表達系統(tǒng)(Baculovirus Expre
2、ssion Vector System,BEVS),通過構(gòu)建的含有hGH基因的轉(zhuǎn)移載體pVL1393-hGH與野生型桿狀病毒AcMNPV DNA共轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的昆蟲細(xì)胞Sf9,使發(fā)生同源重組,外源基因hGH代替AcMNPV中的多角體基因.第二.在傳統(tǒng)的BEVS中,需要經(jīng)過多輪空斑篩選才能得到純化的重組病毒.第三.在Bac-to-Bac系統(tǒng)中,利用PCR誘變方法改變hGH基因5'-UTR序列,構(gòu)建含不同hGH基因5'-UTR序列的重組病毒rA
3、cV-Bac-Δ1hGH,rAcV-Bac-Δ2hGH,rAcV-Bac-Δ3hGH,經(jīng)感染昆蟲細(xì)胞后比較hGH基因表達的水平.第四.昆蟲細(xì)胞是該表達系統(tǒng)的重要組成部分,三種不同的昆蟲細(xì)胞Sf9,Sf21,High Five感染病毒后對HGH的表達水平不同.hGH基因在昆蟲細(xì)胞中的表達存在很多影響因素,該研究從基因表達調(diào)控以及細(xì)胞等方面探討了hGH基因在桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)中表達的影響因素,為高效表達hGH基因提供了理論基礎(chǔ)和新的途徑
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