重組桿狀病毒介導(dǎo)的人組織激肽釋放酶在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文重組桿狀病毒介導(dǎo)的人組織激肽釋放酶在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)姓名：張茹君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：孫懷昌20090501揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文 2E x p r e s s i o n o f R e c o m b i n a n tH u m a n T i s s u eK a l l i k r e i nU s i n g B a c u l o v i r u s —I n s e c tC e l

2、l E x p r e s s i o nS y s t e mM ．D ．C a n d i d a t e ：R u j u nZ h a n gS u p e r v i s o r ：P r o L H u a i c h a n gS u nA b s t r a c tT h e b a c u l o v i r u s ·i n s e c t c e l l e x p r e s s i o n s y s

3、 t e m h a s b e e n e x t e n s i v e l y u s e d t oe x p r e s s r e c o m b i n a n t p r o t e i n s ，w i t h r e l a t i v e l y h i g h y i e l d s a n d a u t h e n t i cp o s t ·t r a n s l a t i o n a l m

4、o d i f i c a t i o n s o f t h e ．e x p r e s s e dp r o d u c t s ．T o e x p r e s s r e c o m b i n a n th u m a n t i s s u ek a l l i k r e i n ( K L K l ) u s i n g t h eb a c u l o v i r u s - i n s e c tc e l le

5、x p r e s s i o ns y s t e m ，t h ek l k lc D N A w a sa m p l i f i e db yh i g hf i d e l i t yP C R f r o mar e c o m b i n a n te u k a r y o t i ce x p r e s s i o n v e c t o rp O V 4 k w i t hs u i t a b l e r e s

6、 t r i c t i o ns i t e sa n d6 x H i st a g i n t r o d u c e d ．A f t e rd i g e s t i o nw i t hr e s t r i c t i o ne n z y m e sB a m H Ia n d X h o I ，t h eP C R p r o d u c tw a s s u b c l o n e di n t o b a c u

7、l o v i r u s t r a n s f e r v e c t o r p F a s t B a c l a n d t h e r e s u l t a n t r e c o m b i n a n t v e c t o rp F a s t B a c l - K L K lw a si n t r o d u c e d i n t o D H l 0 B a c E ．c o l i c o n t a i

8、n i n gt h es h u t t l e v e c t o rB a c m i d ．B y s i t e - s p e c i f i ct r a n s p o s i t i o n ，t h ek l k lc D N A w a s i n t e g r a t e di n t oB a c m i d a n dt h er e c o m b i n a n ts h u t t l ev e c

9、t o rB a c m i d —k l k l w a sg e n e r a t e d ．B yt r a n s f e c t i o n o fs f 9c e l l sw i t hB a c m i d ．K L K l ，t h er e c o m b i n a n tb a c u l o v i r u sw a s o b t a i n e d ．A f t e ri n f e c t i o no

10、 f s ／9c e l l sw i t ht h er e c o m b i n a n tv i r u sf o r3p a s s a g e s ，t h er e c o m b i n a n te n z y m e w a sd e t e c t e db yi n d i r e c tf l u o r e s c e n c ea s s a ya n dW e s t e r nB l o t w i t

11、 ht h ee x p e c t e dm o l e c u l a r w e i g h to f3 5 k D a ．M o s t o ft h er e c o m b i n a n tp r o t e i nw a s p r e s e n ti nt h ec y t o p l a s m ．T h es u c c e s s f u le x p r e s s i o no fr e c o m b i

12、 n a n tK L K l l a i daf o u n d a t i o nf o r d e v e l o p m e n to fr e a g e n t sf o rK L K l i d e n t i f i c a t i o na n df u n c t i o n a ls t u d i e s ．K e y w o r d s ：H u m a n t i s s u ek a l l i k r e