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1、本文從液體深層發(fā)酵產(chǎn)多糖條件的篩選、胞內(nèi)及胞外多糖的制備與分析和多糖的生物學(xué)活性三方面對(duì)IsariafarinosaB05菌株進(jìn)行了研究。 (1)液體深層發(fā)酵產(chǎn)多糖條件中,由單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)確定了IsariafarinosaB05菌株發(fā)酵最佳的培養(yǎng)基組成為:蔗糖3.5%(w/v)、蛋白胨0.5%、酵母臂0.2%、K2HPO40.1%、MgSO40.05%;由單因素實(shí)驗(yàn)確定了該菌株最佳的發(fā)酵條件為:初始pH7.0、溫度25℃、
2、裝液量75mL/250mL、接種量5%(v/v)、培養(yǎng)時(shí)間5d;在最佳的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下,該菌株最大的生物量達(dá)2.12g/100mL,產(chǎn)水溶性胞外多糖可高達(dá)2.14g/L。 (2)確定了胞外多糖的最佳提取工藝為發(fā)酵液在70℃下濃縮至原來(lái)的1/7,然后調(diào)pH7.0,加入3倍乙醇沉淀多糖;胞內(nèi)多糖的最佳提取工藝為干菌體加30倍的水,100℃浸提150min,浸提2次。根據(jù)確定的工藝從IsariafarinosaB05菌株液體發(fā)酵獲
3、得的菌絲體及發(fā)酵液中提取得到水溶性胞內(nèi)多糖(IPS)和胞外多糖(EPS)。 IPS和EPS經(jīng)Q-SepharoseFF陰離子交換柱層析和SephacrylS-300HR凝膠柱層析分離得到主峰IPS1和EPS1。經(jīng)SephacrylS-300HR凝膠柱層析證明純化后IPS1和EPS1均一性較好。IPS1分子量為42kDa;糖含量為90.3%,含甘露糖、半乳糖、葡萄糖,摩爾比為8.0:4.8:1.0;糖醛酸含量為8.00%,有氨基糖
4、存在;蛋白含量7.15%,含有11種常見(jiàn)氨基酸。EPS1分子量為208kDa;糖含量為93.4%,含甘露糖、半乳糖和少量葡萄糖,摩爾比為21.6:4.7:1.0;糖醛酸含量為8.06%,有氨基糖存在,蛋白含量4.38%,含有13種常見(jiàn)氨基酸。通過(guò)稀堿法確定IPS1和EPS1的糖肽鍵為N-糖苷鍵,紅外光譜顯示,二者為β-吡喃糖。 (3)研究了多糖的生物學(xué)活性。IPS1與EPS1對(duì)S180實(shí)體瘤有明顯的抑制作用,IPS1的劑量為20
5、0mg/kg時(shí),抑瘤率最大,為61.63%;EPS1的劑量400mg/kg時(shí)最大,為63.10%。IPS1和EPS1可以明顯促進(jìn)荷瘤小鼠抗氧化酶的活性,在抗腫瘤活性最高的劑量組中,SOD和CAT酶活普遍較高。進(jìn)一步研究了蟲(chóng)草棒束孢多糖的體外抗氧化活性,發(fā)現(xiàn)IPS1具有清除·OH、O2-和H2O2和螯合Fe2+的作用,有強(qiáng)的還原力,可抑制脂質(zhì)過(guò)氧化;而EPS1可清除O2-和H2O2,有強(qiáng)的還原力,可抑制脂質(zhì)過(guò)氧化,但不能清除.OH和螯合F
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