抗體環(huán)型核酸功能配基分子的構(gòu)建.pdf

1、目的：利用SELEX技術(shù)篩選的小鼠抗體IgGFc片段的特異性寡核苷酸配基為原材料，通過對其分子修飾，以提高它檢測乙肝抗原的特異性和靈敏度，建立新型免疫-PCR檢測技術(shù)，同時發(fā)明環(huán)型核酸功能配基。 方法：(1)利用RNAstructureversion4.3軟件設(shè)計信標(biāo)序列Ⅰ、Ⅱ，優(yōu)化環(huán)型核酸功能配基的二級結(jié)構(gòu); (2)巢式PCR技術(shù)連接配基序列與信標(biāo)序列Ⅰ得到中長鏈; (3)分別雙酶切信標(biāo)序列Ⅱ與中長鏈后連接得到

2、長鏈； (4)凝膠阻滯實驗檢測長單鏈的特異性結(jié)合活性； (5)實時定量熒光PCR技術(shù)檢測長單鏈信標(biāo)功能。 結(jié)果：(1)利用RNAstructureversion4.3軟件檢測長單鏈分子，可推測其中配基部分二級結(jié)構(gòu)不變； (2)中長鏈經(jīng)電泳鑒定為141bp； (3)長鏈經(jīng)電泳鑒定為215bp； (4)長單鏈經(jīng)凝膠阻滯實驗鑒定具有特異性結(jié)合活性； (5)長單鏈經(jīng)實時定量熒光PCR實驗鑒