hBMP2基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞與藻酸鈣凝膠復(fù)合物對(duì)骨牽張區(qū)成骨作用的研究.pdf

1、目的:探討骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(human bone morphogenetic protein2,hBMP2)基因轉(zhuǎn)染的兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(bone malTow stromal cells,MSC)與藻酸鈣凝膠的生物相容性及其應(yīng)用于牽張成骨區(qū)的骨生成情況，為骨組織工程中骨缺損的修復(fù)尋找一種新的方法。 方法:抽取成兔髂骨骨髓組織，置于含10﹪胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將質(zhì)粒pCDNA3-hBMP2導(dǎo)入體

2、外培養(yǎng)的MSC中，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后hBMP2基因在細(xì)胞中的表達(dá)情況。將G418篩選獲得的陽性克隆繼續(xù)擴(kuò)增培養(yǎng)，與藻酸鈣凝膠復(fù)合作為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組為單純轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，不同時(shí)間用倒置相差顯微鏡和掃描電鏡觀察，MTT法進(jìn)行細(xì)胞增殖測(cè)定，用堿性磷酸酶進(jìn)行定量檢測(cè)，用臺(tái)盼藍(lán)染色進(jìn)行活力檢查。后將此復(fù)合物注入牽張期末的牽張成骨區(qū)。4周后觀察骨生成情況。對(duì)照組為未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞凝膠復(fù)合物。 結(jié)果:免疫細(xì)胞化學(xué)證實(shí)基因轉(zhuǎn)染成功，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)72小

3、時(shí)和4周MSC中可見棕黃色顆粒，均勻分布于細(xì)胞漿中，深淺不一。轉(zhuǎn)染的MSC體外培養(yǎng)時(shí)復(fù)合或不復(fù)合藻酸鈣凝膠均生長(zhǎng)良好，藻酸鈣利于細(xì)胞的貼附、生長(zhǎng)與增殖，并對(duì)細(xì)胞的功能無不良影響。掃描電鏡示細(xì)胞在材料中形態(tài)飽滿，均勻分布，MTT和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性定量檢測(cè)均未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，臺(tái)盼藍(lán)染色未見藍(lán)染細(xì)胞。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)x線示實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組骨痂密度深。 結(jié)論:hBMP2基因轉(zhuǎn)染的MSC能夠獲得