不同濃度高糖對離體乳鼠心臟成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原和內(nèi)脂素表達(dá)的影響.pdf

1、目的：糖尿病是人類健康的嚴(yán)重威脅之一。糖尿病的各種并發(fā)癥，尤其心血管并發(fā)癥與糖尿病病人高死亡率密切相關(guān)。糖尿病心肌病(diabeticcardiomyopathy，DCM)作為一種糖尿病的早期并發(fā)癥，主要表現(xiàn)為左心室肥厚，心室舒張功能受損，后逐漸出現(xiàn)心室收縮功能障礙，最終發(fā)展為充血性心力衰竭。是糖尿病患者致死的重要原因之一。DCM主要的病理改變是心肌細(xì)胞壞死、肥大及心肌間質(zhì)重構(gòu)及纖維化。心臟成纖維細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)(Extracell

2、ular Matrix，ECM)過度沉積，是導(dǎo)致心肌纖維化的重要環(huán)節(jié)。ECM中最主要的是膠原纖維，在心臟組織Ⅰ型膠原約占ECM的80％。有研究表明，高血糖可誘導(dǎo)氧化損傷并引起ECM在心臟間質(zhì)沉積，導(dǎo)致心室功能下降，是DCM引起心肌細(xì)胞壞死、肥大及纖維化的重要因素，在DCM的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。
　　內(nèi)脂素(visfatin，VF)作為一種較新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子，有類胰島素作用，參與了炎癥、免疫調(diào)節(jié)及能量代謝的過程，與肥胖、

3、糖尿病、冠心病、代謝綜合征、充血性心力衰竭等復(fù)雜性疾病密切相關(guān)。但心臟成纖維細(xì)胞的內(nèi)脂素分泌及與糖尿病引起的心肌病變的關(guān)系研究尚少。本文通過體外模擬糖尿病患者心臟成纖維細(xì)胞外環(huán)境研究其VF及Ⅰ型膠原的表達(dá)，闡明VF對心臟膠原沉積、間質(zhì)重構(gòu)及心肌纖維化可能存在的影響，以求進(jìn)一步了解糖尿病心肌病的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：無菌試驗條件下提取1～4日齡的Sprague-Dawley(SD)大鼠心臟成纖維細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，取第3代心臟成纖維細(xì)

4、胞進(jìn)行實驗。在進(jìn)行48h含血清培養(yǎng)，24h無血清培養(yǎng)之后，選取生長狀態(tài)好的細(xì)胞隨機(jī)分組。實驗分組分為：①對照組(NG：含5.5mmol/L葡萄糖)，②高糖組10mmol/L，③高糖組30mmol/L，④高糖組50mmol/L，⑤高滲組(OSM：含5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇)，每組設(shè)3個復(fù)孔。所有分組在干預(yù)24h后，以GAPDH為內(nèi)參，應(yīng)用Real time PCR和ELISA技術(shù)檢測心臟成纖維細(xì)胞中VF和Ⅰ型膠

5、原的mRNA含量和培養(yǎng)基中VF和Ⅰ型膠原的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：(一)高糖對心臟成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原表達(dá)的影響
　　與對照組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)均明顯增加，并有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。與高滲透壓組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)均有增加，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。高滲透壓組Ⅰ型前膠原的基因表

6、達(dá)與對照組比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。高糖組30mmol/L較高糖組10mmol/LⅠ型前膠原mRNA表達(dá)增多，且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。高糖組50mmol/L較高糖組30mmol/LⅠ型前膠原mRNA表達(dá)減少，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　同時用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定培養(yǎng)基中Ⅰ型膠原產(chǎn)物的含量表明：與對照組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組Ⅰ型膠原表達(dá)均明顯增

7、加，并有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。與高滲透壓組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組Ⅰ型膠原表達(dá)均增加且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。高滲透壓組Ⅰ型膠原的表達(dá)與對照組比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。高糖30mmol/L組較10mmol/L組Ⅰ型膠原表達(dá)增多，且有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。50mmol/L組較30mmol/L組Ⅰ型膠原表達(dá)增多，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　(二)高糖對心

8、臟成纖維細(xì)胞VF表達(dá)的影響
　　高糖組30mmol/L，50mmol/L組VFmRNA表達(dá)與對照組比較均增加且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)：高糖10mmol/L組較對照組增加，也具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。高糖組30mmol/L，50mmol/L組VFmRNA表達(dá)與高滲透壓組比較均增加且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)；高糖10mmol/L組較高滲透壓組VFmRNA表達(dá)增加但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。高滲透壓組VF的基因表達(dá)與

9、對照組比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。高糖組30mmol/L較高糖組10mmol/LVFmRNA表達(dá)增加，且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。高糖組50mmol/L較高糖組30mmol/LVFmRNA表達(dá)減少，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　應(yīng)用用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定培養(yǎng)基中VF含量：與對照組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組VF均有所增加，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與

10、高滲透壓組比較，高糖組10mmol/L，30mmol/L，50mmol/L三組VF均有所增加，且均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。高滲透壓組VF的表達(dá)與對照組比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。高糖組30mmol/L較高糖組10mmol/LVF表達(dá)增多，且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。高糖組50mmol/L較高糖組30mmol/LVF表達(dá)稍減少，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：高糖可促進(jìn)心臟成纖維細(xì)胞VF和Ⅰ型膠原的表達(dá)