RhoA-ROCK信號通路在內(nèi)脂素誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞肥大中的作用.pdf

1、目的：眾所周知，脂肪組織既是機體能量存儲器官，也是內(nèi)分泌器官，它能夠分泌一些可溶性因子，又稱脂肪細(xì)胞因子，包括瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素、腫瘤壞死因子-β等。內(nèi)脂素(visfatin)是近些年發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子。脂肪細(xì)胞因子可以部分解釋肥胖、胰島素抵抗、β細(xì)胞功能障礙、血管內(nèi)皮功能障礙與動脈粥樣硬化之間的聯(lián)系。
　　內(nèi)脂素主要是由內(nèi)臟脂肪組織產(chǎn)生和分泌的分子量為52kDa的多肽，在生物進(jìn)化過程中其氨基酸序列高度保守。內(nèi)脂素不僅具有類胰島

2、素作用，可降低血糖，而且能夠促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化與脂質(zhì)存儲。此外，內(nèi)脂素還具有多種生物學(xué)功能，與肥胖、炎癥、胰島素抵抗及動脈粥樣硬化緊密相關(guān)。新近研究表明：內(nèi)脂素具有心血管保護(hù)性作用。
　　Rho蛋白為小分子鳥苷酸結(jié)合蛋白，是細(xì)胞信號通路的分子開關(guān)。Rho激酶(ROCK)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是第一個被發(fā)現(xiàn)的Rho下游效應(yīng)物。RhoA/ROCK信號通路在多種疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，如：高血壓、動脈粥樣硬化、心力衰竭、心

3、肌肥大及糖尿病相關(guān)疾病等。心肌肥大是對由各種原因引起心臟負(fù)荷過重所作出的代償反應(yīng)，包括高血壓、心肌梗塞、瓣膜心臟疾病及擴(kuò)張型心肌病等，主要表現(xiàn)在心肌細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成增加，從而導(dǎo)致其細(xì)胞體積增大并同時伴有間質(zhì)增生的心臟重量增加。然而，其代償并不是無限的，如果其病因不能得以消除，最終會導(dǎo)致心力衰竭甚至猝死。因此，對心肌肥大信號通路的研究，能夠有助于預(yù)防甚至逆轉(zhuǎn)心肌肥大，也為藥物干預(yù)提供新思路。雖然近年來有關(guān)RhoA/ROCK信號通路與血管緊

4、張素Ⅱ、自發(fā)性高血壓、異丙腎上腺素、壓力超負(fù)荷所導(dǎo)致的心肌肥大的關(guān)系已有一些報道，然而，抑制Rho激酶對內(nèi)脂素誘發(fā)的心肌肥大影響到目前為止還無研究能夠闡明。本實驗使用Rho激酶抑制藥Y-27632來研究RhoA/ROCK信號通路在內(nèi)脂素誘導(dǎo)的大鼠心肌肥大中的作用。
　　方法：無菌試驗條件下提取新生SD大鼠心肌細(xì)胞，在體外進(jìn)行培養(yǎng)。選取生長狀態(tài)較好的細(xì)胞隨機分為4組：①正常對照組②重組大鼠內(nèi)脂素干預(yù)組(濃度為100ng/ml重組大鼠

5、內(nèi)脂素干預(yù)48h)③Y-27632組(濃度為10umol/1的Y-27632干預(yù)48h)④Y-27632+重組大鼠內(nèi)脂素干預(yù)組(先用濃度為10umol/1的Y-27632干預(yù)2h后加入濃度為100ng/ml重組大鼠內(nèi)脂素干預(yù)48h)。應(yīng)用美國Image-Proplus專業(yè)圖像分析軟件測定各組心肌細(xì)胞表面積，分別應(yīng)用real time-PCR和ELISA法檢測各組心肌細(xì)胞BNP-mRNA和心肌細(xì)胞培養(yǎng)液中BNP的水平。
　　結(jié)果：<