17β-雌二醇對(duì)睪酮誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)的作用.pdf

1、[目的]: 從細(xì)胞和分子水平研究雄激素(睪酮，Testosterone，T)對(duì)心肌肥大反應(yīng)的影響及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，探討 17β-雌二醇(17β-estradiol，E<,2>)對(duì)T誘導(dǎo)的心肌肥大的影響，并研究細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2 蛋白)在性激素對(duì)心肌肥大影響中的作用，進(jìn)一步加深對(duì)性激素在心血管系統(tǒng)作用的了解，從而為心肌肥厚等心血管疾病的防治提供新的思路與理論依據(jù)。 [方法]: 1、采用差速貼壁法分離、

2、純化培養(yǎng)新生SD大鼠心肌細(xì)胞，以T刺激體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞，建立心肌肥大細(xì)胞模型。 2、采用 Bradford法測(cè)定心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量、同位素法分析<'3>H-亮氨酸(<'3>H-leucine，<'3>H-leu)摻入、IBAS 圖像分析處理系統(tǒng)測(cè)定心肌細(xì)胞表面積，作為檢測(cè)心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)的指標(biāo)。 3、采用免疫印跡法檢測(cè)心肌細(xì)胞ERK1/2 蛋白表達(dá)水平的變化。 [結(jié)果]: 1、10<'-10>～10<'

3、-6>mol/L的T作用于心肌細(xì)胞24 h 后，新生大鼠心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量、<'3>H-leu摻入和細(xì)胞表面積均增加，其中以10<'-8>molL 作用最強(qiáng)。10<'-8>molL 濃度的 T 作用于心肌細(xì)胞 1h、6h、12h、24h、48h 后，新生大鼠心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量和<'3>H-leu摻入均增加，其中以作用24 h時(shí)效應(yīng)最強(qiáng)；雄激素受體拮抗劑氟他胺(Flutamide，F(xiàn)lu)10<'-8>molL預(yù)處理2 h可抑制T誘導(dǎo)的心

4、肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量的增加，而Flu單獨(dú)作用對(duì)心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量沒(méi)有影響。 2、10<'-10>～10<'-6>mol/L的E<,2>可明顯對(duì)抗T誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量和<'3>H-leu摻入的增加，其中以10<'-8>mol/L 濃度的E<,2>作用最為明顯；預(yù)先給予10<'-6>mol/L濃度的雌激素受體拮抗劑Tamoxifen(Ta)作用2 h，可部分取消E<,2>對(duì)T誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量增加的抑制效應(yīng)，單獨(dú)給予Ta對(duì)心

5、肌細(xì)胞蛋白質(zhì)含量沒(méi)有影響。 3、用50μmol/L濃度的ERK上游激酶特異性抑制劑PD98059預(yù)處理2 h，可抑制 T 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞<'3>H-leu摻入的增加，但不能增強(qiáng)E<,2>對(duì)T誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞<'3>H-leu摻入的抑制作用；單獨(dú)給予PD98059對(duì)心肌細(xì)胞<'3>H-leu摻入沒(méi)有影響。 4、10<'-8>mol/L濃度的T作用24 h使心肌細(xì)胞的ERK1/2的蛋白表達(dá)顯著增加，同時(shí)給予10<'-8>mol

6、/L濃度的E<,2>可以對(duì)抗T誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞ERK1/2 蛋白表達(dá)增加，單獨(dú)給予E<,2>對(duì)ERK1/2 蛋白表達(dá)沒(méi)有影響；10<'-5>mol/L濃度的Flu預(yù)處理2 h可逆轉(zhuǎn)T誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞ERK1/2蛋白表達(dá)的增加，單獨(dú)給予Flu對(duì)ERK1/2蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響；10<'-6>mol/L濃度的Ta預(yù)處理2 h可部分取消E<,2>對(duì)T誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞ERK1/2蛋白表達(dá)增加的抑制作用，單獨(dú)給予Ta對(duì)ERK1/2蛋白表達(dá)無(wú)影響。