生防解淀粉芽胞桿菌的分離鑒定及其作用研究.pdf

1、中圖分類號(hào)：G243UDC：579密級(jí)：公開學(xué)校代碼：10094訝4￡湃菡尤孥碩士學(xué)位論文(學(xué)歷碩士)生防解淀粉芽胞桿菌的分離鑒定及其作用研究Isolation，IdentificationandInhibitoryEffectofBiocontrolBacteriaBacillusAmyloliquefaciens作者姓名：呂釗指導(dǎo)教師：張麗萍研究員趙寶華教授學(xué)科專業(yè)：微生物研究方向：應(yīng)用微生物論文開題日期：2011年3月10日摘要灰

2、霉病是一種發(fā)病率高、傳播速度快、危害性大、難以防治的植物氣傳真菌病害，病原菌灰葡萄孢(Botrytiscinerea)可侵染200多種植物。傳統(tǒng)的化學(xué)防治不僅造成抗藥性和環(huán)境污染等問題，還給人類健康帶來了嚴(yán)重危害。利用有益微生物及其代謝產(chǎn)物來防治植物病害，安全高效、不易產(chǎn)生抗藥性、對(duì)環(huán)境無污染、對(duì)人體無害，已經(jīng)成為植物病害防治最有潛力的方法。為了研制防治蔬菜灰霉病的生防制劑，本論文分離篩選對(duì)黃瓜灰霉病有高效拮抗作用的芽胞桿菌，對(duì)拮抗菌株

3、進(jìn)行分類鑒定、發(fā)酵優(yōu)化，并對(duì)其抗菌物質(zhì)性質(zhì)和防病機(jī)理進(jìn)行初步探究。以黃瓜灰霉病為指示菌，采用平板對(duì)峙法從河北、江蘇、吉林等省多地農(nóng)田土壤中分離37株具有拮抗活性的芽胞桿菌，通過平板擴(kuò)散法和傳代培養(yǎng)，篩選到一株遺傳穩(wěn)定性好、能夠產(chǎn)生抑菌活性代謝產(chǎn)物的高效拮抗菌D1；抗菌譜測(cè)定表明，其對(duì)黃瓜灰霉病菌(Botrytiscinerea)、番茄葉霉病菌(Fulviafulva)、黃瓜炭疽病菌(Colletotrichumorbiculare)、以

4、及金黃色葡萄球菌(StaphyloccocusaureusRosenbach)、大腸桿菌(Escherichiacoli)等多種病原真菌和細(xì)菌菌具有顯著抑菌效果；結(jié)合形態(tài)特征、生理生化特征以及16SrDNA序列分析，將菌株D一1鑒定為解淀粉芽胞桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)。利用正交試驗(yàn)與響應(yīng)面法結(jié)合的方法，借助Minitab軟件分析，確定菌株D1產(chǎn)抗菌物質(zhì)的液體發(fā)酵最適培養(yǎng)基組份為：淀粉188％，牛肉膏17

5、6％，酵母膏074％，KH2P04025％，K2HP0401％，(NH4)2S04008％；最佳培養(yǎng)條件為：初始pH為7，接種量為4％，振蕩培養(yǎng)38h。優(yōu)化后菌株D1發(fā)酵液抑菌活性提高了417％。菌株D1發(fā)酵濾液性質(zhì)研究表明：其在90。C以下、pH6～12、紫外線照射8h抑菌活性穩(wěn)定；常溫儲(chǔ)存6個(gè)月活性保持在80％以上。采用酸沉淀和飽和硫酸銨法對(duì)抗菌物質(zhì)進(jìn)行粗分離，確定60％濃度飽和硫酸銨進(jìn)行沉淀分離；通過SephadexG75凝膠柱層